RT-qPCR Kit II ya moja kwa moja
Maelezo ya Kiti:
◮Direct RT-qPCR Kit, kwa kutumia Foreasy Reverse Transcriptase na Foreasy HS Taq DNA Polymerase inayotengenezwa na Foregene, yenye akiba ya kipekee ya athari, hufanya kifurushi hiki kiwe na ukinzani mkubwa na uoanifu, na kinaweza kujaribu moja kwa moja majibu ya matumizi ya mfumo wa Foregene Lysis kama kiolezo.Seti hii inaweza kutumika kwa ajili ya kifaa cha kutambua COVID-19 asidi ya nukleiki na ukuzaji wa vifaa vya kugundua bakteria wa pathogenic asidi ya nukleiki.
Maelezo
RT-qPCR Kit ya moja kwa moja hutoa bafa ya RT-qPCR iliyofungashwa kando, Foreasy HS Taq DNA Polymerase yenye ufanisi wa juu.na Foreasy Reverse Transcriptase(MMLV),kuifanya iwe rahisi kwa kuunda vifaa vya nyuma na marekebisho ya mfumo, ndani ya uthibitishaji rahisi.
Direct RT-qPCR Kit, kwa kutumia Foreasy Reverse Transcriptase na Foreasy HS Taq DNA Polymerase inayotengenezwa na Foregene, yenye akiba ya kipekee ya athari, hufanya kifurushi hiki kiwe na ukinzani mkubwa na uoanifu, na kinaweza kujaribu moja kwa moja majibu ya matumizi ya mfumo wa Foregene Lysis kama kiolezo.Seti hii inaweza kutumika kwa ajili ya kifaa cha kutambua COVID-19 asidi ya nukleiki na ukuzaji wa vifaa vya kugundua bakteria wa pathogenic asidi ya nukleiki.
Seti hii inaweza moja kwa moja kuwa sehemu ya bidhaa ya IVD, ikitumia kwa urahisi na haraka.Inahitaji tu uthibitishaji rahisi, bila kuendeleza tena.
Vipimo
500T, 50,000T
Vipengele vya kit
| Yaliyomo kwenye vifaa (Mfumo wa majibu ya 20 μL) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500 T | 50,000 T | |
| Rahisi RTranscriptase tofauti (200 U/μL) | 50 μL×1 | 1 ml×5 |
| Njia rahisi ya HS Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 100 μL×1 | 1 ml×10 |
| 2× Moja kwa moja RT-qPCRBafa | 1 ml × 5 | 500 ml × 1 |
| Maagizo | 1 | 1 |
Hatua za Uendeshaji
A: Tayarisha kiolezo na kitendanishi
1. Tayarisha kiolezo cha RNA kilichotayarishwa (Inapendekezwa kutumia mfululizo wa vifaa vya Foregene Total RNA Isolation Kit ili kutoa na kusafisha kiolezo cha RNA) au sampuli ya bidhaa iliyopasuka (Inapendekezwa kutumia mfumo wa Foregene Lysis), primers maalum(10 μM) na vifaa vingine vya matumizi, chombo.
2. Weka 2× Direct RT-qPCR Buffer, RNase-Free ddH2O na 20× ROX Reference Dye(ikiwa inahitajika) kwenye kisanduku chenye barafu, na kufanya hizi kuyeyuka kiasili, na kuchanganywa taratibu.
B: Tayarisha mfumo wa RT-qPCR
Pata nusu ya ujazo wa akiba ya majibu ya mfumo wa majibu (kwa mfano, ikiwa ujazo wa mfumo ni 20 μL, unahitaji kupata 10 μL 2× Moja kwa moja RT-qPCR Buffer). Kwakiasi kinacholingana cha enzyme,tunapendekeza hivyoM-MLV: 10-30 U/20 μL mfumo wa majibu,TaqDNA polymerase:Mfumo wa mmenyuko wa 1-2 U/20 μLhili ni pendekezo letu, unapaswa kulijaribu na kulirekebisha), ongeza kiolezo cha RNA, vianzio mahususi na vichunguzi, na uongeze RNase-Free ddH2O hadi 20 μL.Maandalizi mahususi ya mfumo wa majibu ya RT-qPCR yanaweza kurejelewa kwenye jedwali lifuatalo 1.
Jedwali la 1: Tayarisha mfumo wa RT-qPCR
| Sehemu | Kiasi | Mkusanyiko wa mwisho |
| 2× Moja kwa moja RT-qPCR Buffer | 10 μL | 1× |
| Foreasy Reverse Transcriptase(MMLV) | 10-30 U | |
| Njia rahisi ya HS Taq DNA Polymerase | 1-2 U | |
| Primer ya Mbele(10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
| Kitangulizi cha Nyuma (10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
| Uchunguzi (4 μM) | 1 μL | 200nM |
| Kiolezo (RNA au Lysate) | X μL | |
| 20× ROX Reference Dye | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6.4-X) μL | |
| Jumla ya Kiasi | 20 μL |
Kumbuka: Forward Primer na Reverse Primer ni vianzilishi maalum vya jeni lengwa.Mfumo wa qPCR unaweza kurekebishwa kulingana na mifano ya majaribio ya vitendo na PCR.Tunapendekeza 400nM kwa mkusanyiko wa mwisho wa vitangulizi vingi.Rekebisha kiasi cha primers maalum na probes kulingana na mkusanyiko ulioandaliwa na mkusanyiko wa mwisho uliopendekezwa, tafadhali.
1*: Chagua mkusanyiko wa mwisho unaofaa wa ROX Reference Dye kulingana na vifaa tofauti vya PCR.Mkusanyiko bora wa Rangi ya Marejeleo ya ROX ya vifaa vya kawaida vya PCR inavyoonyeshwa kwenye jedwali lifuatalo:
| Vyombo vya PCR vya kiasi | Mkusanyiko wa mwisho wa ROX Reference Dye |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Hatua ya Kwanza,na kadhalika. | 1× (kwa mfano, ongeza 1μl 20×ROX Reference Dye katika mfumo wa mmenyuko wa 20 μL) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P na Mx4000, nk. | 0.5× (kwa mfano, ongeza 0.5μl 20×ROX Reference Dye katika mfumo wa 20 μL wa majibu) |
| Chombo cha Roche PCR, chombo cha PCR cha Bio-Rad, chombo cha PCR cha kiasi cha Eppendorf, n.k. | Bila ROX Reference Dye |
Uhifadhi na maisha ya rafu
Seti inapaswa kuhifadhiwa kwa -20 ± 5 ℃.Inapaswa kuhifadhiwa mara moja kwenye -20 ℃ jokofu ya joto.Muda wa uhalali ni miaka 2 ikiwa itahifadhiwa katika hali inayofaa.
