page_banner

Seli ya Moja kwa Moja ya RT qPCR Kit—SYBR GREEN I

Maelezo ya Kiti:

◮Rahisi na bora: kwa teknolojia ya Cell Direct RT, sampuli za RNA zinaweza kupatikana kwa dakika 7 pekee.

Sampuli ya mahitaji ni ndogo, hadi seli 10 zinaweza kujaribiwa.

◮Utumiaji wa juu: inaweza kutambua kwa haraka RNA katika seli zilizokuzwa katika sahani 384, 96, 24, 12, 6-visima.

Kifutio cha DNA kinaweza kuondoa haraka jenomu zilizotolewa, kupunguza sana athari kwenye matokeo ya majaribio yanayofuata.

Mfumo wa RT na qPCR ulioboreshwa hufanya unukuzi wa hatua mbili wa RT-PCR kuwa bora zaidi na PCR mahususi zaidi, na sugu zaidi kwa vizuizi vya majibu ya RT-qPCR.

foregene strength


Maelezo ya Bidhaa

Lebo za bidhaa

Maswali Yanayoulizwa Mara kwa Mara

Maelezo

Seti hii hutumia mfumo wa kipekee wa akiba ya lysis ambao unaweza kutoa kwa haraka RNA kutoka kwa sampuli za seli zilizoboreshwa kwa miitikio ya RT-qPCR, na hivyo kuondoa mchakato wa utakaso wa RNA unaotumia muda na unaotatiza.Kiolezo cha RNA kinaweza kupatikana kwa dakika 7 tu.Ya 5×Mchanganyiko wa RT wa moja kwa moja na 2×Vitendanishi vya Moja kwa moja vya qPCR Mix-SYBR vinavyotolewa na kit vinaweza kupata matokeo ya muda halisi ya PCR.

5×Mchanganyiko wa RT wa moja kwa moja na 2×Direct qPCR Mix-SYBR ina ustahimilivu mkubwa wa vizuizi, na lysate ya sampuli inaweza kutumika kama kiolezo cha RT-qPCR moja kwa moja.Seti hii ina nakala ya kipekee ya RNA yenye mshikamano wa hali ya juu Foregene reverse transcriptase, na Hot D-Taq DNA polymerase, dNTPs, MgCl2, bafa ya majibu, kiboreshaji cha PCR na kidhibiti.

Vipimo

200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns

Vipengele vya kit

Sehemu ya I

Bafa CL

Foregene Protease Plus II

Bafa ST

Sehemu ya II

Kifutio cha DNA

5× Mchanganyiko wa RT wa moja kwa moja

2× Moja kwa Moja qPCR Mix-SYBR

50× ROX Reference Dye

RNase-Free ddH2O

Maagizo

Vipengele & faida

Rahisi na bora : kwa kutumia teknolojia ya Cell Direct RT, sampuli za RNA zinaweza kupatikana kwa dakika 7 pekee.

■ Sampuli ya mahitaji ni ndogo, hadi seli 10 zinaweza kujaribiwa.

■ Utoaji wa juu: inaweza kutambua kwa haraka RNA katika seli zilizokuzwa katika sahani 384, 96, 24, 12, 6 za visima.

■ Kifutio cha DNA kinaweza kuondoa haraka jenomu zilizotolewa, kupunguza kwa kiasi kikubwa athari kwenye matokeo ya majaribio yanayofuata.

■ Mfumo wa RT na qPCR ulioboreshwa hufanya unukuzi wa RT-PCR wa hatua mbili kuwa bora zaidi na PCR mahususi zaidi, na kustahimili vizuizi vya majibu ya RT-qPCR.

Programu ya kit

Upeo wa maombi: seli za utamaduni.

- RNA iliyotolewa kwa sampuli ya uchanganuzi: inatumika tu kwa kiolezo cha RT-qPCR cha kifaa hiki.

- Seti hii inaweza kutumika kwa madhumuni yafuatayo: uchanganuzi wa usemi wa jeni, uthibitishaji wa athari ya kunyamazisha jeni ya siRNA, uchunguzi wa dawa, n.k.

Mchoro

Cell Direct RT qPCR diagram

Uhifadhi na maisha ya rafu

Sehemu ya I ya kifaa hiki inapaswa kuhifadhiwa kwa 4℃;Sehemu ya II inapaswa kuhifadhiwa kwa -20 ℃.

 Foregene Protease Plus II inapaswa kuhifadhiwa saa 4℃, usigandishe ifikapo -20℃.

 Wakala 2×Direct qPCR Mix-SYBR inapaswa kuhifadhiwa saa -20katika giza;ikiwa inatumiwa mara kwa mara, inaweza pia kuhifadhiwa saa 4℃ kwa hifadhi ya muda mfupi (tumia ndani ya siku 10).


  • Iliyotangulia:
  • Inayofuata:

  • Kanuni za muundo wa primer ya Muda Halisi ya PCR

    Sambaza Kitangulizi na Kitangulizi cha Nyuma

    Kwa PCR ya Wakati Halisi, muundo wa primer ni muhimu sana.Viunzilishi vinahusiana na umaalum na ufanisi wa ukuzaji wa PCR, na vinaweza kuundwa kwa kuzingatia kanuni zifuatazo:

    Urefu wa primer: 18-30bp.

    Maudhui ya GC: 40-60%.

    Thamani ya Tm: Programu ya usanifu wa primer, kama vile Primer 5, inaweza kutoa thamani ya Tm ya kitangulizi.Thamani za Tm za vianzilishi vya juu na chini zinapaswa kuwa karibu iwezekanavyo.Fomula ya hesabu ya Tm pia inaweza kutumika: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Wakati wa kutekeleza PCR, halijoto iliyo chini ya thamani ya primer Tm ya 5 °C kwa ujumla huchaguliwa kama halijoto ya kuchubua (ongezeko linalolingana la halijoto ya anneal inaweza kuongeza umaalum wa mmenyuko wa PCR).

    Primers na bidhaa za PCR:

    Urefu wa bidhaa ya ukuzaji wa kitangulizi cha PCR ni ikiwezekana 100-150bp.

    Vipimo vya uundaji katika eneo la sekondari la muundo wa kiolezo vinapaswa kuepukwa iwezekanavyo.

    Epuka uundaji wa besi 2 au zaidi zinazosaidiana kati ya ncha 3′ za vianzio vya juu na vya chini vya mkondo.

    Msingi wa msingi wa 3′ hauwezi kuwepo na G au C 3 za ziada mfululizo.

    The primers wenyewe hawezi kuwa na miundo ya ziada, vinginevyo muundo wa hairpin utaundwa, unaoathiri amplification ya PCR.

    ATCG inapaswa kusambazwa kwa usawa iwezekanavyo katika mfuatano wa kwanza, na msingi wa 3′ unapaswa kuepukwa kama T.

    Kiambatisho cha 1: Kifurushi cha kijenzi cha Kifaa cha Cell Direct RT-qPCR

    1.Suluhisho la Lysis ya seli


    Suluhisho la Lysis ya seli

    Vipengele vya kit

    (Mfumo wa 24 wa kisima / kisima)

    DRT-01011-A1

    DRT-01011-A2

    100 T

    500 T

    SehemuI

    Bafa CL

    20 ml

    100 ml

    Foregene Protease Plus II

    400 μl

    1 ml × 2

    Bafa ST

    1 ml × 2

    10 ml

    SehemuII

    Kifutio cha DNA

    400 μl

    1 ml × 2

    2. RT Mchanganyiko


    Mchanganyiko wa RT

    Vipengele vya kit

    (Mfumo wa majibu ya 20 μl)

    DRT-01011-B1

    200 T

    5× Mchanganyiko wa RT wa moja kwa moja

    800 μl

    RNase-Free ddH2O

    1.7 ml × 2

     

    Mchanganyiko wa 3.qPCR


    Mchanganyiko wa qPCR

    Vipengele vya kit

    (Mfumo wa majibu ya 20 μl)

    DRT-01011-C1

    DRT-01011-C2

    200 T

    1000 T

    2× Moja kwa Moja qPCR Mix-SYBR

    1 ml × 2

    1.7 ml × 6

    50× ROX Reference Dye

    40 μl

    200 μl

    RNase-Free ddH2O

    1.7 ml

    10 ml

    Andika ujumbe wako hapa na ututumie