Seli Jumla ya Vifaa vya Kutenga vya RNA Jumla ya Vifaa vya Kusafisha Kutengwa vya RNA kutoka kwa seli
Maelezo ya Kiti:
Jumla ya RNA iliyosafishwa sana na ya ubora wa juu inaweza kupatikana kutoka kwa seli mbalimbali za utamaduni katika dakika 11.
RNase-Bila
Inatumika kwa joto la kawaida (15-25 ℃)
Na Safu ya Kusafisha DNA
Mavuno ya juu ya RNA
Haraka: Maliza uchimbaji katika dakika 11
Usalama: Hakuna kemikali ya kikaboni
Maelezo
Seti hii hutumia safu wima na fomula iliyotengenezwa na Foregene, ambayo inaweza kutoa RNA ya hali ya juu na ubora wa juu kutoka kwa seli zilizokuzwa katika sahani 96, 24, 12, na 6 za visima.
Seti hii hutoa Safu bora ya Kusafisha ya DNA, ambayo inaweza kutenganisha kiunga cha juu na seli za seli, kuunganisha na kuondoa DNA ya genomic.Operesheni ni rahisi na inaokoa wakati.
TSafu wima ya RNA pekee inaweza kuunganisha RNA kwa fomula ya kipekee.Idadi kubwa ya sampuli zinaweza kusindika wakati huo huo.
Vipengele vya kit
| Muundo wa vifaa | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 T | 200 T | |
| Bafa cRL1* | 25 ml | 100 ml |
| Bafa cRL2 | 15 ml | 60 ml |
| Bafa RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Bafa RW2 | 24 ml | 96 ml |
| RNase-Free ddH2O | 10 ml | 40 ml |
| Safu wima ya RNA Pekee | 50 | 200 |
| Safu ya Kusafisha ya DNA | 50 | 200 |
| Maagizo | 1 | 1 |
*Tafadhali vaa glavu na uchukue hatua za ulinzi wakati wa operesheni kwani Buffer cRL1 na Buffer RW1 zina chumvi za chaotropiki zinazowasha.
Vipengele&faida
■ Mchakato wote unaendeshwa kwa joto la kawaida (15-25 ℃), bila umwagaji wa barafu na centrifugation ya joto la chini.
■ Seti nzima haina RNase, hakuna haja ya kuwa na wasiwasi kuhusu uharibifu wa RNA.
■ Safu ya Kusafisha DNA hufunga DNA haswa, ili seti iweze kuondoa uchafuzi wa DNA ya jeni bila kuongeza DNase ya ziada.
■ Mavuno ya juu ya RNA: Safu wima ya RNA pekee na fomula ya kipekee inaweza kusafisha RNA kwa ufasaha.
■ Kasi ya haraka: rahisi kufanya kazi na inaweza kukamilika kwa dakika 11.
■ Usalama: Hakuna kitendanishi kikaboni kinachohitajika.
■ Ubora wa juu: RNA iliyosafishwa ni ya usafi wa juu, haina protini na uchafu mwingine, na inaweza kukidhi majaribio mbalimbali yanayofuata.
Programu ya kit
Inafaa kwa uchimbaji na utakaso wa jumla wa RNA kutoka kwa seli zilizokuzwa katika sahani 96, 24, 12, na 6-visima.
Mtiririko wa kazi
Mchoro
Mchoro wa betri ya jeli ya agarose ya Seli Jumla ya RNA Isolation Kit ilishughulikia nambari tofauti za seli zilizo hapo juu, upungufu wa ujazo wa 20μl, kuchukua 2μl jumla iliyosafishwa ya RNA 1%.
Uhifadhi na maisha ya rafu
Seti inaweza kuhifadhiwa kwa miezi 12 kwa joto la kawaida (15-25 ℃) au 2-8 ℃ kwa muda mrefu zaidi (miezi 24).
Buffer cRL1 inaweza kuhifadhiwa kwa 4 ℃ kwa mwezi 1 baada ya kuongeza 2-hydroxy-1-ethanethiol(si lazima).
RNA haijatolewa au mavuno ya RNA ni ya chini
Mara nyingi kuna mambo mbalimbali yanayoathiri ufanisi wa uokoaji, kama vile: maudhui ya sampuli ya tishu ya RNA, njia ya uendeshaji, kiasi cha elution, nk.
1. Umwagaji wa barafu au cryogenic (4 °C) centrifugation ulifanyika wakati wa operesheni.
Pendekezo: Fanya kazi kwenye joto la kawaida (15-25 ° C) katika mchakato mzima, usiweke umwagaji wa barafu na centrifuge kwenye joto la chini.
2. Uhifadhi usiofaa wa sampuli au muda mwingi wa kuhifadhi sampuli.
Pendekezo: Hifadhi sampuli kwa -80 °C au zigandishe katika nitrojeni kioevu na uepuke matumizi ya mara kwa mara ya kufungia-yeyusha;jaribu kutumia tishu mpya au seli zilizokuzwa kwa uchimbaji wa RNA.
3. Uchambuzi wa sampuli haitoshi.
Pendekezo: Wakati wa kutengeneza homojeni ya tishu, hakikisha kwamba tishu zimeunganishwa vya kutosha na kwamba seli za tishu zimegawanyika vya kutosha kueleza kutolewa kwa RNA.
4. Kielelezo hakijaongezwa ipasavyo.
Pendekezo: Thibitisha kuwa RNase-Free ddH2O huongezwa kwa njia ya kushuka katikati ya utando wa safu ya utakaso.
5. Kiasi sahihi cha ethanoli kabisa hakikuongezwa kwa Buffer RL2 au Buffer RW2.
Pendekezo: Fuata maagizo, ongeza kiasi sahihi cha ethanoli kabisa kwenye Buffer RL2 na Buffer RW2 na uchanganye vizuri kabla ya kutumia kit.
6. Kipimo cha sampuli ya tishu haifai.
Pendekezo: Tumia 10-20 mg ya tishu au (1-5) × 106seli kwa kila 500 μl bafa RL1, kwani matumizi ya tishu kupita kiasi yanaweza kusababisha utoboaji wa RNA uliopunguzwa.
7. Kiasi kisichofaa cha elution au upotoshaji usio kamili.
Pendekezo: Kiasi cha elution ya safu ya utakaso ni 50-200 μl;ikiwa athari ya kufichua si ya kuridhisha, inashauriwa kuongeza muda wa kuweka halijoto ya chumba baada ya kuongeza ddH isiyo na joto ya RNase-Free.2O, kwa mfano kwa dakika 5-10.
8.Safu ya utakaso ina mabaki ya ethanoli baada ya kuosha kwa Buffer RW2.
Pendekezo: Iwapo kuna mabaki ya ethanoli baada ya kuoshwa kwa Buffer RW2, upenyezaji wa bomba tupu kwa dakika 1, muda wa operesheni ya upenyezaji wa mirija tupu unaweza kuongezwa hadi dakika 2, au safu ya utakaso inaweza kuwekwa kwenye joto la kawaida kwa dakika 5 ili kuondoa ethanoli iliyobaki vya kutosha.
RNA iliyosafishwa imeharibika
Ubora wa RNA iliyosafishwa inahusiana na mambo kama vile uhifadhi wa sampuli, uchafuzi wa RNase, na upotoshaji, n.k.
1. Sampuli za tishu hazitunzwa kwa wakati.
Pendekezo: Ikiwa sampuli za tishu au seli hazitumiki kwa wakati ufaao baada ya kukusanywa, hifadhi mara moja kwenye -80 °C au nitrojeni kioevu.Ili kutoa RNA, tumia tishu mpya au sampuli ya seli inapowezekana.
2. Kufungia mara kwa mara kwa sampuli za tishu.
Pendekezo: Wakati wa kuhifadhi sampuli za tishu, ni bora kuzikatwa vipande vidogo kwa ajili ya kuhifadhi, na kuondoa moja ya vipande wakati wa kutumia ili kuepuka kufungia mara kwa mara kwa sampuli na uharibifu wa RNA.
3. RNase imetambulishwa au haijavaa glavu, masks, nk wakati wa operesheni.
Pendekezo: Majaribio ya uchimbaji wa RNA hufanywa vyema zaidi katika vyumba tofauti vya upotoshaji vya RNA na jedwali huondolewa kabla ya jaribio.
Vaa glavu na vinyago vinavyoweza kutupwa wakati wa jaribio ili kupunguza uharibifu wa RNA unaosababishwa na kuanzishwa kwa RNase.
4. Vitendanishi huchafuliwa na RNase wakati wa matumizi.
Pendekezo: Badilisha na Seti mpya ya Kutenga ya RNA ya Wanyama kwa majaribio yanayohusiana.
5. Mirija ya katikati, vidokezo, n.k. inayotumika katika upotoshaji wa RNA imechafuliwa na RNase.
Pendekezo: Thibitisha kuwa mirija ya katikati, vidokezo, bomba, n.k. zinazotumika katika uchimbaji wa RNA zote hazina RNase.
RNA iliyopatikana iliyosafishwa huathiri majaribio ya chini ya mkondo
RNA iliyosafishwa kwa safu wima ya utakaso, ikiwa ioni za chumvi, maudhui ya protini ni makubwa sana yataathiri jaribio la mto, kama vile: unukuzi wa kinyume,Northern Blot et al.
1. RNA iliyoondolewa ina mabaki ya ioni ya chumvi.
Pendekezo: Thibitisha kuwa kiasi sahihi cha ethanoli kimeongezwa kwenye Buffer RW2 na ufanye safu 2 za utakaso kwa kasi ya katikati iliyoonyeshwa kwa operesheni;ikiwa kuna mabaki yoyote ya ioni ya chumvi, acha safu wima ya utakaso hadi kwenye Bufa RW2 kwa dakika 5 kwa joto la kawaida na uimarishe katikati ili kuongeza uondoaji wa uchafuzi wa chumvi.
2. Mabaki ya ethanoli katika RNA iliyopunguzwa.
Pendekezo: Thibitisha kuwa baada ya kuosha bafa ya RW2, fanya operesheni ya kupenyeza mirija tupu kwa kasi ya centrifugation iliyoonyeshwa kwa ajili ya uendeshaji, ongeza muda wa operesheni ya kupenyeza mirija tupu hadi dakika 2 ikiwa bado kuna mabaki ya ethanoli, au iache kwenye joto la kawaida kwa mita 5.
