Jumla ya Seti ya Kutenga ya RNA ya mmea Jumla ya Kifurushi cha RNA cha Purificaiton cha Mimea Kidogo katika Polysaccharides na Polyphenols
Vipimo
Maandalizi 50, Maandalizi 200
Seti hii hutumia safu wima na fomula iliyotengenezwa na Foregene, ambayo inaweza kutoa RNA ya hali ya juu na ubora wa juu kutoka kwa tishu mbalimbali za mmea zilizo na polisakaridi na poliphenoli kidogo.Kwa sampuli za mimea zilizo na polisakaridi au poliphenoli nyingi, inashauriwa kutumia Plant Total RNA Isolation Plus Kit ili kupata matokeo bora ya uchimbaji wa RNA.Seti hii hutoa safu wima ya Kusafisha DNA ambayo inaweza kuondoa DNA ya jeni kwa urahisi kutoka kwa nguvu kuu na lysate ya tishu.Safu wima ya RNA pekee inaweza kuunganisha RNA kwa ufanisi.Seti inaweza kusindika idadi kubwa ya sampuli kwa wakati mmoja.
Mfumo mzima hauna RNase, hivyo RNA iliyosafishwa haitaharibika.Buffer PRW1 na Buffer PRW2 zinaweza kuhakikisha kuwa RNA inayopatikana haijachafuliwa na protini, DNA, ayoni, na misombo ya kikaboni.
Vipengele vya kit
| Buffer PSL1, Buffer PS, Buffer PSL2 |
| Buffer PRW1, Buffer PRW2 |
| RNase-Free ddH2O, Safu wima ya Kusafisha DNA |
| Safu wima ya RNA Pekee |
| Maagizo |
Vipengele&faida
■ Operesheni kwenye joto la kawaida (15-25℃) katika mchakato mzima, bila umwagaji wa barafu na uingizaji hewa wa joto la chini.
■ Seti kamili ya RNase-Free, hakuna haja ya kuwa na wasiwasi kuhusu uharibifu wa RNA.
■ Safu ya Kusafisha DNA hufungamana na DNA mahususi, ili kifaa kiweze kuondoa uchafuzi wa DNA ya jeni bila kuongeza DNase.
■ Mavuno ya juu ya RNA: Safu wima ya RNA pekee na fomula ya kipekee inaweza kusafisha RNA kwa ufasaha.
■ Kasi ya haraka: rahisi kufanya kazi na inaweza kukamilika ndani ya dakika 30.
■ Usalama: hakuna kitendanishi kikaboni kinachohitajika.
■ Ubora wa juu: Vipande vya RNA vilivyosafishwa ni vya usafi wa juu, visivyo na protini na uchafu mwingine, na vinaweza kukidhi matumizi mbalimbali ya majaribio ya chini ya mkondo.
Programu ya kit
Inafaa kwa ajili ya uchimbaji na utakaso wa jumla wa RNA kutoka kwa sampuli za tishu za mimea safi au zilizogandishwa (hasa tishu za majani ya mimea) na maudhui ya chini ya polysaccharide na polyphenoli.
Mtiririko wa kazi
Mchoro
Plant Total RNA Isolation Kit Plus ilichakatwa 50mg ya majani mapya ya polysaccharides na polyphenols, na 5% iliyosafishwa RNA ilijaribiwa na electrophoresis.
1: Ndizi
2: Ginkgo
3: Pamba
4: komamanga
Uhifadhi na maisha ya rafu
Seti inaweza kuhifadhiwa kwa miezi 12 kwa joto la kawaida (15-25 ℃) katika mazingira kavu, na 2-8 ℃ kwa muda mrefu zaidi (miezi 24).
Buffer PSL1 inaweza kuhifadhiwa kwa 4 ℃ kwa mwezi 1 baada ya kuongeza 2-hydroxy-1-ethanethiol(si lazima).
Mwongozo wa Uchambuzi wa Tatizo
Uchambuzi ufuatao wa shida unazoweza kukutana nazoJumla ya KiwandaRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.
Safu ya mzunguko imefungwa
Uzuiaji wa safu ya mzunguko utasababisha mavuno ya RNA kupunguzwa au hata kutoweza kusafishwa ili kupata RNA, na ubora wa RNA iliyopatikana itakuwa chini.
Uchambuzi wa sababu za kawaida:
1. Sampuli haijavunjwa kabisa.
Mgawanyiko usio kamili wa sampuli unaweza kuzuia Safu ya DNA-Cleaning, ambayo inaweza pia kuathiri mavuno na ubora wa RNA.Tunapendekeza kwamba wakati wa kugawanya sampuli, saga haraka kiasi cha kutosha cha nitrojeni kioevu ili kuvunja tishu kama vile kuta za seli na membrane za seli za sampuli iwezekanavyo.Kwa sampuli za mimea ya polyphenol polysaccharides, tunapendekeza utumie Plant Total RNA Isolation Kit Plus.
2.Aspirate Safu ya DNA-Cleaning iliyotengwa ya supernatant, aspirate iwezekanavyo seli debris pellet.
Pellet ya uchafu wa seli aspirated inaweza kuziba Safu ya RNA-pekee wakati wa taratibu za utangazaji wa RNA (tazama hatua ya 5 ya utaratibu, hatua ya 6 ya utaratibu wa poliphenoli ya polisakaridi).Tunapendekeza kwamba uangalifu lazima uchukuliwe wakati wa kutamani mtawala huyu ili kuzuia uchafu wa seli kutamaniwa.
3. Kiasi cha awali cha sampuli ni kikubwa mno.
Utumizi mwingi wa sampuli utasababisha mgawanyiko usio kamili wa sampuli au uchanganuzi usiokamilika wa seli na Buffer PRL1 au Buffer PSL1, na kusababisha safu wima ya utakaso iliyozibwa kwa shughuli za utakaso.Seti ya Kutenga ya Jumla ya RNA ya mmea ina kiwango cha juu cha awali cha miligramu 50 kwa utakaso mmoja wa sampuli inayoendeshwa.Kwa sampuli za mimea ya polyphenol polysaccharides, tunapendekeza kwamba ujaribu Plant Total RNA Isolation Kit Plus.
4. Joto la centrifuge ni la chini sana.
Kutengwa na utakaso mzima wa RNA isipokuwa kwa usumbufu wa nitrojeni ya kioevu ya tishu za sampuli, hatua zote hufanywa kwa joto la kawaida (20-25 ° C).Baadhi ya vijito vya joto la chini vina halijoto chini ya 20 °C, ambayo inaweza kusababisha vizuizi katika Safu ya Kusafisha ya DNA na/au Safu ya RNA pekee.Hili likitokea, weka halijoto ya centrifuge hadi 20-25 °C na upashe joto mchanganyiko wa lysis na/au uongeze wa nguvu ya juu ya kutenganisha ethanoli hadi 37 °C.
Hakuna RNA iliyotolewa au mavuno ya RNA ni ya chini
Kwa kawaida kuna mambo mengi yanayoathiri ufanisi wa uokoaji, kama vile: sampuli ya maudhui ya RNA, njia ya uendeshaji, kiasi cha elution, n.k.
Uchambuzi wa sababu za kawaida kama hizi:
1.Bafu ya barafu au joto la chini (4 ° C) centrifugation ilifanyika wakati wa operesheni.
Pendekezo: Fanya kazi kwenye joto la kawaida (15-25 ° C) katika mchakato mzima, usifanye umwagaji wa barafu na centrifugation ya joto la chini.
2.RNA imeharibiwa kwa sababu ya uhifadhi usiofaa wa sampuli au uhifadhi wa muda mrefu wa sampuli.
Pendekezo: Sampuli mpya zilizokusanywa zinapaswa kugandishwa haraka kwenye nitrojeni kioevu, na kisha zihifadhiwe kwa -80°C kwa muda mrefu, ziepuke kugandisha mara kwa mara na kuyeyusha sampuli;au mara moja loweka sampuli kwenye suluhisho la RNAlater la kiimarishaji cha RNA (sampuli za wanyama).
3.Kugawanyika kwa sampuli haitoshi na lysis husababisha kuziba kwa safu ya utakaso.
Pendekezo: Unaposaga tishu, tafadhali hakikisha kwamba tishu zimesagwa vya kutosha, na uhamishe kwa haraka hadi Buffer PSL1 iliyotayarishwa awali (thibitisha kwamba sehemu sahihi ya β-ME imeongezwa, angalia hatua ya 1 ya utaratibu).
4.Kielelezo kiliongezwa kimakosa.
Pendekezo: Hakikisha kuwa RNase-Free ddH2O inaingizwa katikati ya utando wa safu ya utakaso.
5.Kiasi sahihi cha ethanoli kabisa hakikuongezwa kwenye Buffer PSL2 au Buffer PRW2.
Pendekezo: Tafadhali fuata maagizo, ongeza kiasi sahihi cha ethanoli kabisa kwenye Buffer PSL2 na Buffer PRW2 na uchanganye vizuri kabla ya kit kutumika.
6.Kiasi cha sampuli ya tishu hakifai.
Pendekezo: Tumia miligramu 50 za tishu kwa kila 500 μl ya Buffer PSL1.Kutumia tishu nyingi kutapunguza kiasi cha RNA kilichotolewa na usafi wa RNA inayosababisha pia itapungua.Tunapendekeza sana kwamba kipimo cha awali cha sampuli haipaswi kuzidi miligramu 50 kwa kila operesheni ya uchimbaji wa RNA.
7. Kiasi kisichofaa cha elution au upotoshaji usio kamili.
Pendekezo: Kiasi kisichojulikana cha safu ya utakaso ni 50-200 μl;ikiwa athari ya kufichua si ya kuridhisha, inashauriwa kuongeza muda katika halijoto ya kawaida baada ya kuongeza ddH isiyo na joto ya RNase-Free.2O, kama vile dakika 5-10.
8.Safu ya utakaso ina mabaki ya ethanoli baada ya kuosha na Buffer PRW2.
Pendekezo: Iwapo bomba tupu limetiwa kipenyo kwa dakika 1 na bado kuna ethanoli iliyobaki baada ya kuosha katika Buffer PRW2, unaweza kuongeza muda wa mrija tupu wa kupenyeza hadi dakika 2, au uweke safu wima ya utakaso kwenye joto la kawaida kwa dakika 5 ili kuondoa kabisa ethanoli iliyobaki.
9.Kiti kilitumika kimakosa.
Pendekezo: Kwa sampuli za mimea ya poliphenolic polisakaridi, kutumia vifaa vya kawaida kama vile Plant Total RNA Isolation Kit huenda isiweze kupata sampuli bora za RNA.Tunapendekeza utumie Plant Total RNA IsolationKit Plus, ambayo imeundwa mahususi kwa sampuli za mimea ya polysaccharide polyphenolic.Seti iliyotengenezwa mahususi kwa ajili ya kuchimba RNA kutoka kwa sampuli za mimea ya polyphenol na polysaccharide.
Thamani ya OD260/OD280 ni ya chini
RNA elution yenye ddH2O na kutumika kwa usomaji wa spectrophotometer husababisha thamani za chini za OD260/OD280.Tunapendekeza utumie 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 (badala ya RNase-Free ddH2O to elute RNA) ili kupata thamani zinazofaa kiasi za OD260/OD280, angalia “Ukadiriaji wa RNA wa Kuzingatia na Utakaso” kwenye ukurasa wa 19.
RNA iliyosafishwa imeharibika
Ubora wa RNA iliyosafishwa unahusiana na mambo kama vile uhifadhi wa sampuli, uchafuzi wa RNase, na upotoshaji.
Uchambuzi wa sababu za kawaida:
1.Sampuli za tishu hazikuhifadhiwa kwa wakati baada ya kukusanywa.
Pendekezo: Iwapo sampuli za tishu hazitatumika kwa wakati baada ya kukusanywa, tafadhali zihifadhi kwenye nitrojeni kioevu kwenye joto la chini mara moja au zihamishe hadi -80°C kwa hifadhi ya muda mrefu baada ya kuganda kwa haraka katika nitrojeni kioevu, au tumbukiza sampuli hizo mara moja kwenye kiimarishaji cha RNA cha RNAlater solution (sampuli za wanyama ).Kwa uchimbaji wa RNA, jaribu kutumia sampuli mpya za tishu zilizokusanywa.
2.Kugandisha mara kwa mara na kuyeyusha sampuli za tishu.
Pendekezo: Wakati wa kuhifadhi sampuli za tishu, ni bora kuzikata vipande vidogo kwa ajili ya kuhifadhi, na kuchukua sehemu yao wakati wa kuzitumia ili kuepuka uharibifu wa RNA unaosababishwa na kufungia mara kwa mara na kuyeyusha sampuli.
3.RNase huletwa kwenye chumba cha upasuaji au glavu za kutupwa, masks, nk.
Pendekezo: Majaribio ya uchimbaji wa RNA hufanywa vyema zaidi katika shughuli tofauti za RNA, na jedwali la maabara linapaswa kusafishwa kabla ya jaribio, na glavu na vinyago vya kutupwa vinapaswa kuvaliwa wakati wa jaribio ili kuepuka uharibifu wa RNA unaosababishwa na kuanzishwa kwa RNase kwa kiwango kikubwa zaidi.
4.Kitendanishi kimechafuliwa na RNase wakati wa matumizi.
Pendekezo: Badilisha kwa mfululizo mpya wa vifaa vya uchimbaji vya RNA vya jumla vya mmea kwa majaribio yanayohusiana.
5.Mirija ya centrifuge na vidokezo vya pipette vinavyotumika kwa upotoshaji wa RNA vimechafuliwa na RNase.
Pendekezo: Hakikisha kwamba mirija ya katikati, vidokezo vya bomba, bomba, n.k. zinazotumika katika uchimbaji wa RNA zote hazina RNase.
Miongozo ya Maagizo:
Mwongozo wa Maelekezo ya Vifaa vya Kutengwa vya RNA vya mmea
