Seti ya Kutenga ya RNA ya Wanyama Jumla ya Vifaa vya Kuchimba na Kusafisha vya RNA kwa Tishu za Wanyama na Seli
Maelezo ya Kiti:
Haraka na kwa ufanisi toa jumla ya RNA yenye ubora wa juu na wa hali ya juu kutoka kwa tishu mbalimbali za wanyama.
Hakuna haja ya kuwa na wasiwasi juu ya uharibifu wa RNA.Mfumo mzima hauna RNase
Ondoa DNA kwa ufanisi kwa kutumia Safu ya Kusafisha ya DNA
Ondoa DNA bila kuongeza DNase
Rahisi-shughuli zote zinakamilika kwa joto la kawaida
Haraka - operesheni inaweza kukamilika kwa dakika 30
Salama-hakuna kitendanishi kikaboni kinachotumiwa
Usafi wa juu-OD260/280≈1.8-2.1
Maelezo ya Kits
Maandalizi 50, Maandalizi 200
Seti hii hutumiaspin safu na formulailiyotengenezwa na kampuni yetu, ambayo inaweza kutoa jumla ya usafi wa juu na ubora wa juu kutoka kwa tishu mbalimbali za wanyama na ufanisi wa juu.Inatoa Safu ya ufanisi ya DNA-Cleaning, ambayo inaweza kutenganisha kwa urahisi na kutangaza DNA ya genomic kutoka kwa supernatant na lysate ya tishu, rahisi na ya kuokoa muda;Safu wima ya RNA pekee inaweza kuunganisha RNA kwa ufanisi na inaweza kuchakatwa kwa wakati mmoja kwa kutumia fomula ya kipekee Sampuli nyingi.
Mfumo mzima ni RNase-Free, ili RNA iliyotolewa haiharibiki;Buffer RW1, Buffer RW2 mfumo wa kuosha bafa, ili RNA iliyopatikana isiwe na protini, DNA, ayoni, na uchafuzi wa kiwanja kikaboni.
Vipengele vya kit
| Seti ya Kutenga ya RNA ya Wanyama | ||
| Vipengele vya kit | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 T | 200 T | |
| Bafa RL1* | 25 ml | 100 ml |
| Bafa RL2 | 15 ml | 60 ml |
| Bafa RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Bafa RW2 | 24 ml | 96 ml |
| RNase-Free ddH2O | 10 ml | 40 ml |
| Safu ya RNA pekee | 50 | 200 |
| Safu ya Kusafisha ya DNA | 50 | 200 |
| Mwongozo wa Maagizo | kipande 1 | kipande 1 |
Maelezo ya bidhaa
| Umbizo | Zungusha safu wima | Sehemu ya utakaso | Foregene safu, reagent |
| Flux | Sampuli 1-24 | Muda kwa maandalizi | ~dakika 30 (sampuli 24) |
| Centrifuge | Centrifuge ya dawati | Kutengana kwa pyrolysis | Mgawanyiko wa Centrifugal |
| Sampuli | Tishu za wanyama;seli | Kiasi cha sampuli | Tishu: 10-20 mg;Kiini:(1-5)×106 |
| Kiwango cha elution | 50-200 μL | Kiwango cha juu cha upakiaji | 850 μL |
Vipengele&faida
■ Hakuna haja ya kuwa na wasiwasi kuhusu uharibifu wa RNA;mfumo mzima ni RNase-Free
■ Ondoa kwa ufanisi DNA kwa kutumia Safu ya Kusafisha ya DNA
■ Ondoa DNA bila kuongeza DNase
■ Rahisi-shughuli zote hukamilika kwa joto la kawaida
■ Uendeshaji wa haraka unaweza kukamilika kwa dakika 30
■ Salama-hakuna kitendanishi kikaboni kinachohitajika
■ Usafi wa juu -OD260/280≈1.8-2.1
Programu ya kit
Inafaa kwa ajili ya uchimbaji na utakaso wa jumla wa RNA kutoka kwa aina mbalimbali za tishu za wanyama safi au waliohifadhiwa au seli zilizopandwa.
Vigezo vya bidhaa
■ Programu za mkondo wa chini: usanisi wa cDNA wa safu ya kwanza, RT-PCR, upangaji wa molekuli, Blot ya Kaskazini, nk.
■ Sampuli: tishu za wanyama, seli zilizokuzwa
■ Kipimo: Tishu 10-20mg, Seli(2-5)×106
■ Upeo wa uwezo wa kumfunga DNA wa safu wima ya utakaso: 80 μg
■ Kiasi cha elution: 50-200 μl
Mchoro
Seti ya Kutengwa ya RNA ya Wanyama iliyotibiwa 20mg
Sampuli safi za panya, chukua 5% iliyosafishwa jumla ya RNA 1% agar
Electrophoresis ya glycogel
1: Wengu 2: Figo
3: Ini 4: Moyo
Uhifadhi na maisha ya rafu
Seti inaweza kuhifadhiwa kwa miezi 24 kwa joto la kawaida (15-25 ℃) au 2-8 ℃ kwa muda mrefu zaidi.Buffer RL1 inaweza kuhifadhiwa kwa 4 ℃ kwa mwezi 1 baada ya kuongeza β- mercaptoethanol (si lazima).
Makala zilizotajwa
1.IF:18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., et al.MRNA-Loaded Lipid-Kama Nanoparticles kwa Uhariri wa Msingi wa Ini Kupitia Uboreshaji wa Muundo wa Mchanganyiko wa Kati.Adv.Kazi.Mater.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.IF:18.187:He X, Hong W, Yang J, et al.Apoptosis ya hiari ya seli katika utayarishaji wa seli za shina za matibabu hutoa athari za kinga kupitia kutolewa kwa phosphatidylserine.Malengo ya Usafirishaji wa Mawimbi huko.2021 Julai 14;6(1):270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.IF:17.97:Dai Z, Liu H, Liao J, et al.Marekebisho ya N7-Methylguanosine tRNA huongeza tafsiri ya mRNA ya oncogenic na kukuza maendeleo ya ndani ya damu ya cholangiocarcinoma.Kiini cha Mol.2021 Julai 29:S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.IF:9.225:Cao X, Shu Y, Chen Y, et al.Urekebishaji wa Mettl14-Mediated m6A Huwezesha Kuzaliwa upya kwa Ini kwa Kudumisha Endoplasmic Reticulum Homeostasis.Kiini Mol Gastroenterol Hepatol.2021;12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
Vifaa vya kutengwa vya RNA kwa vyanzo vingine vya sampulizinapatikana:
Kiini, mmea, virusi, damu, nk.
RNA haijatolewa au mavuno ya RNA ni ya chini
Mara nyingi kuna mambo mbalimbali yanayoathiri ufanisi wa uokoaji, kama vile: maudhui ya sampuli ya tishu ya RNA, njia ya uendeshaji, kiasi cha elution, nk.
1. Umwagaji wa barafu au cryogenic (4 °C) centrifugation ulifanyika wakati wa operesheni.
Pendekezo: Fanya kazi kwenye joto la kawaida (15-25 ° C) katika mchakato mzima, usiweke umwagaji wa barafu na centrifuge kwenye joto la chini.
2. Uhifadhi usiofaa wa sampuli au muda mwingi wa kuhifadhi sampuli.
Pendekezo: Hifadhi sampuli kwa -80 °C au zigandishe katika nitrojeni kioevu na uepuke matumizi ya mara kwa mara ya kufungia-yeyusha;jaribu kutumia tishu mpya au seli zilizokuzwa kwa uchimbaji wa RNA.
3. Uchambuzi wa sampuli haitoshi.
Pendekezo: Wakati wa kutengeneza homojeni ya tishu, hakikisha kwamba tishu zimeunganishwa vya kutosha na kwamba seli za tishu zimegawanyika vya kutosha kueleza kutolewa kwa RNA.
4. Kielelezo hakijaongezwa ipasavyo.
Pendekezo: Thibitisha kuwa RNase-Free ddH2O huongezwa kwa njia ya kushuka katikati ya utando wa safu ya utakaso.
5. Kiasi sahihi cha ethanoli kabisa hakikuongezwa kwa Buffer RL2 au Buffer RW2.
Pendekezo: Fuata maagizo, ongeza kiasi sahihi cha ethanoli kabisa kwenye Buffer RL2 na Buffer RW2 na uchanganye vizuri kabla ya kutumia kit.
6. Kipimo cha sampuli ya tishu haifai.
Pendekezo: Tumia 10-20 mg ya tishu au (1-5) × 106seli kwa kila 500 μl bafa RL1, kwani matumizi ya tishu kupita kiasi yanaweza kusababisha utoboaji wa RNA uliopunguzwa.
7. Kiasi kisichofaa cha elution au upotoshaji usio kamili.
Pendekezo: Kiasi cha elution ya safu ya utakaso ni 50-200 μl;ikiwa athari ya kufichua si ya kuridhisha, inashauriwa kuongeza muda wa kuweka halijoto ya chumba baada ya kuongeza ddH isiyo na joto ya RNase-Free.2O, kwa mfano kwa dakika 5-10.
8.Safu ya utakaso ina mabaki ya ethanoli baada ya kuosha kwa Buffer RW2.
Pendekezo: Iwapo kuna mabaki ya ethanoli baada ya kuoshwa kwa Buffer RW2, upenyezaji wa bomba tupu kwa dakika 1, muda wa operesheni ya upenyezaji wa mirija tupu unaweza kuongezwa hadi dakika 2, au safu ya utakaso inaweza kuwekwa kwenye joto la kawaida kwa dakika 5 ili kuondoa ethanoli iliyobaki vya kutosha.
RNA iliyosafishwa imeharibika
Ubora wa RNA iliyosafishwa inahusiana na mambo kama vile uhifadhi wa sampuli, uchafuzi wa RNase, na upotoshaji, n.k.
1. Sampuli za tishu hazitunzwa kwa wakati.
Pendekezo: Ikiwa sampuli za tishu au seli hazitumiki kwa wakati ufaao baada ya kukusanywa, hifadhi mara moja kwenye -80 °C au nitrojeni kioevu.Ili kutoa RNA, tumia tishu mpya au sampuli ya seli inapowezekana.
2. Kufungia mara kwa mara kwa sampuli za tishu.
Pendekezo: Wakati wa kuhifadhi sampuli za tishu, ni bora kuzikatwa vipande vidogo kwa ajili ya kuhifadhi, na kuondoa moja ya vipande wakati wa kutumia ili kuepuka kufungia mara kwa mara kwa sampuli na uharibifu wa RNA.
3. RNase imetambulishwa au haijavaa glavu, masks, nk wakati wa operesheni.
Pendekezo: Majaribio ya uchimbaji wa RNA hufanywa vyema zaidi katika vyumba tofauti vya upotoshaji vya RNA na jedwali huondolewa kabla ya jaribio.
Vaa glavu na vinyago vinavyoweza kutupwa wakati wa jaribio ili kupunguza uharibifu wa RNA unaosababishwa na kuanzishwa kwa RNase.
4. Vitendanishi huchafuliwa na RNase wakati wa matumizi.
Pendekezo: Badilisha na Seti mpya ya Kutenga ya RNA ya Wanyama kwa majaribio yanayohusiana.
5. Mirija ya katikati, vidokezo, n.k. inayotumika katika upotoshaji wa RNA imechafuliwa na RNase.
Pendekezo: Thibitisha kuwa mirija ya katikati, vidokezo, bomba, n.k. zinazotumika katika uchimbaji wa RNA zote hazina RNase.
RNA iliyopatikana iliyosafishwa huathiri majaribio ya chini ya mkondo
RNA iliyosafishwa kwa safu wima ya utakaso, ikiwa ioni za chumvi, maudhui ya protini ni makubwa sana yataathiri jaribio la mto, kama vile: unukuzi wa kinyume,Northern Blot et al.
1. RNA iliyoondolewa ina mabaki ya ioni ya chumvi.
Pendekezo: Thibitisha kuwa kiasi sahihi cha ethanoli kimeongezwa kwenye Buffer RW2 na ufanye safu 2 za utakaso kwa kasi ya katikati iliyoonyeshwa kwa operesheni;ikiwa kuna mabaki yoyote ya ioni ya chumvi, acha safu wima ya utakaso hadi kwenye Bufa RW2 kwa dakika 5 kwa joto la kawaida na uimarishe katikati ili kuongeza uondoaji wa uchafuzi wa chumvi.
2. Mabaki ya ethanoli katika RNA iliyopunguzwa.
Pendekezo: Thibitisha kuwa baada ya kuosha bafa ya RW2, fanya operesheni tupu ya kupenyeza mirija kwa kasi ya centrifugation iliyoonyeshwa kwa ajili ya uendeshaji, ongeza muda wa operesheni ya upenyezaji wa mirija tupu hadi dakika 2 ikiwa bado kuna mabaki ya ethanoli, au uiache kwenye joto la kawaida kwa dakika 5 baada ya bomba tupu la centrifugation ili kuongeza uondoaji wa ethanol.
