(96-well) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR Kit - Taqman
Maelezo
The(96-vizuri) QuickEasyTM Seli ya Moja kwa Moja ya RT-qPCR Kit-Taqmanhutoamfumo wa kipekee wa bafa ya lysisto Toa haraka RNAkutoka kwa seli ya kitamadunisampuli za athari za RT-qPCR, kuondoa utumiaji wa wakati na kazi ngumuMchakato wa utakaso wa RNA, na huchukua dakika 7 pekee kupata kiolezo kinachohitajika cha RNA.The5× Mchanganyiko wa RT wa moja kwa mojana2× Moja kwa Moja qPCR Mix-SYBRzinazotolewa katika sanduku unaweza haraka nakwa ufanisi kupata kiasi cha wakati halisiMatokeo ya PCR.
5× Direct RT Mix na 2× Direct qPCR Mix-Taqman zina uwezo mkubwa wa kustahimili vizuizi, na inaweza kutumia lisaiti ya sampuli kujaribiwa kama kiolezo cha unukuzi wa kinyume na upanuzi mahususi.Kitendanishi kina Foregene unique Reverse Transcriptase yenye mshikamano wa juu wa RNA , pamoja na Hot D- Taq DNA Polymerase , dNTPs, MgCl2 , bafa ya majibu, kiboreshaji cha PCR na kiimarishaji, na inaweza kutumika pamoja na bafa ya lysis kutambua sampuli haraka, kwa urahisi na kwa usahihi, na ina sifa za unyeti wa juu, umaalumu thabiti na uthabiti mzuri.
Seti hiyo inalenga uchanganuzi wa mfumo mdogo wa seli 96 zilizokuzwa vizuri, na ina usawa mzuri na uthabiti;vijenzi vya vifaa vinatoa miitikio 96 ya lisisi, miitikio 96 ya unukuzi wa kinyume na miitikio ya qPCR 96×2, ambayo inaweza kufikia sahani ya seli zenye visima 96 kwa matumizi ya mara moja, kuepuka uchafuzi unaosababishwa na kufungua mara kwa mara, kugandisha na kuyeyusha vitendanishi na uharibifu wa utendaji wa kitendanishi.
Vipengele vya kit
Muundo wa vifaa ( 50 μMfumo wa lysis/20 μLRT mfumo wa majibu /20μMfumo wa mmenyuko wa L qPCR) | DRT-03021 | Toa maoni | |
96T | |||
SehemuI | BafaCL | 5 ml | KiiniLysis |
ForegeneProtease Plus II | 100 μL | ||
BafaST | 500 μL | ||
Sehemu II | DNAKifutio | 100 μL | |
5× Mchanganyiko wa RT wa moja kwa moja | 400 μL | RT | |
2× Mchanganyiko wa qPCR wa moja kwa moja-Taqman | 1 mL × 2 | qPCR | |
50× ROX Reference Dye | 400µL | ||
RNase- BureddH2 O | 1.7mL |
| |
Mmkundu | 1 kipande | 1 huduma |
*: Kifutio cha DNA kitendanishi kimejumuishwa katika Sehemu ya II ya kifurushi;Vipengee vya Cell Lysis, RT, na qPCR vinaweza kununuliwa tofauti.
Vipengele&faida
■Rahisi na bora : kwa kutumia teknolojia ya Cell Direct RT, sampuli za RNA zinaweza kupatikana kwa dakika 7 pekee.
■ Sampuli ya mahitaji ni ndogo, hadi seli 10 zinaweza kujaribiwa.
■ Utoaji wa juu: inaweza kutambua kwa haraka RNA katika seli zilizokuzwa katika sahani 384, 96, 24, 12, 6 za visima.
■ Kifutio cha DNA kinaweza kuondoa haraka jenomu zilizotolewa, kupunguza kwa kiasi kikubwa athari kwenye matokeo ya majaribio yanayofuata.
■ Mfumo wa RT na qPCR ulioboreshwa hufanya unukuzi wa RT-PCR wa hatua mbili kuwa bora zaidi na PCR mahususi zaidi, na sugu zaidi kwa vizuizi vya majibu ya RT-qPCR.
Programu ya kit
Upeo wa maombi: seli za utamaduni.
- RNA iliyotolewa kwa sampuli ya uchanganuzi: inatumika tu kwa kiolezo cha RT-qPCR cha kifaa hiki.
- Seti hii inaweza kutumika kwa madhumuni yafuatayo: uchanganuzi wa usemi wa jeni, uthibitishaji wa athari ya kunyamazisha jeni ya siRNA, uchunguzi wa dawa, n.k.
Uhifadhi na maisha ya rafu
Sehemu ya I ya kit hii inapaswa kuhifadhiwa saa 4℃;Sehemu ya II inapaswa kuhifadhiwa kwa -20 ℃.
Foregene Protease Plus II inapaswa kuhifadhiwa saa 4℃, usigandishe ifikapo -20℃.
Wakala 2×Direct qPCR Mix-Taqman inapaswa kuhifadhiwa saa -20℃katika giza;ikiwa inatumiwa mara kwa mara, inaweza pia kuhifadhiwa saa 4℃ kwa hifadhi ya muda mfupi (tumia ndani ya siku 10).
Kanuni za muundo wa primer ya Muda Halisi ya PCR
Sambaza Kitangulizi na Kitangulizi cha Nyuma
Kwa PCR ya Wakati Halisi, muundo wa primer ni muhimu sana.Viunzilishi vinahusiana na umaalum na ufanisi wa ukuzaji wa PCR, na vinaweza kuundwa kwa kuzingatia kanuni zifuatazo:
- Urefu wa primer: 18-30bp.
- Maudhui ya GC: 40-60%.
- Thamani ya Tm: Programu ya usanifu wa primer, kama vile Primer 5, inaweza kutoa thamani ya Tm ya kitangulizi.Thamani za Tm za vianzilishi vya juu na chini zinapaswa kuwa karibu iwezekanavyo.Fomula ya hesabu ya Tm pia inaweza kutumika: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Wakati wa kutekeleza PCR, halijoto iliyo chini ya thamani ya primer Tm ya 5 °C kwa ujumla huchaguliwa kama halijoto ya kuchuja (ongezeko linalolingana la halijoto ya kuchubua kunaweza kuongeza umaalum wa mmenyuko wa PCR).
- Primers na bidhaa za PCR:
- Urefu wa bidhaa ya ukuzaji wa kitangulizi cha PCR ni ikiwezekana 100-150bp.
- Vipimo vya uundaji katika eneo la sekondari la muundo wa kiolezo vinapaswa kuepukwa iwezekanavyo.
- Epuka uundaji wa besi 2 au zaidi zinazosaidiana kati ya ncha 3′ za vianzio vya juu na vya chini vya mkondo.
- Msingi wa msingi wa 3′ hauwezi kuwepo na G au C 3 za ziada mfululizo.
- The primers wenyewe hawezi kuwa na miundo ya ziada, vinginevyo muundo wa hairpin utaundwa, unaoathiri amplification ya PCR.
- ATCG inapaswa kusambazwa kwa usawa iwezekanavyo katika mfuatano wa kwanza, na msingi wa 3′ unapaswa kuepukwa kama T.
Nyongeza1:Cmoja kwa mojaRT-qPCR Sehemu ya vifaat nyongeza pakiti
1.Kiini Lysis Solution
Suluhisho la Lysis ya seli | |||
Vipengele vya kit (mfumo wa 24 wa kisima / kisima) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
100 T | 500 T | ||
SehemuI | Bafa CL | 20 ml | 100 ml |
Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
Bafa ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
SehemuII | Kifutio cha DNA | 400 μl | 1 ml × 2 |
Mchanganyiko wa RT | |
Vipengele vya kit (Mfumo wa majibu ya 20 μl) | DRT-01011-B1 |
200 T | |
5× Mchanganyiko wa RT wa moja kwa moja | 800 μl |
RNase-Free ddH2O | 1.7 ml × 2 |
Mchanganyiko wa qPCR | ||
Vipengele vya kit (Mfumo wa majibu ya 20 μl) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
200 T | 1000 T | |
2× Moja kwa moja qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1.7 ml × 6 |
20× ROX Reference Dye | 40 μl | 200 μl |
RNase-Free ddH2O | 1.7 ml | 10 ml |
Miongozo ya Maagizo: