Cell Direct RT qPCR Kit—Taqman Direct Cell Lysis Cell Tayari Hatua Moja qRT-PCR Kits Probe
Maelezo
Bidhaa hii hutumia mfumo wa kipekee wa akiba ya lysis ili kutoa kwa haraka RNA kutoka kwa sampuli za seli zilizotengenezwa kwa miitikio ya RT-qPCR, kuondoa mchakato unaotumia muda na unaosumbua wa utakaso wa RNA, na dakika 7 pekee ili kupata kiolezo kinachohitajika cha RNA, kwa kutumia Mchanganyiko wa 5× Direct RT, 2× Direct qPCR Mix-Taqman inayotolewa na kifurushi cha muda halisi cha matokeo.
5× Direct RT Mix na 2× Direct qPCR Mix-Taqman zina ustahimilivu mkubwa wa vizuizi na zinaweza kufanya urejeshaji bora na ukuzaji mahususi kwa kutumia lilisati ya sampuli itakayopimwa kama kiolezo.Kitendanishi kina Foregene Reverse Transcriptase, Moto D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl2, Reaction Buffer, PCR Optimizer na Stabilizer, ambayo inaweza kutumika pamoja na lysis buffer kutambua kwa haraka na kwa urahisi sampuli, na ina sifa za unyeti wa juu, umaalumu na uthabiti.
Vipimo
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Vipengele vya kit
QuickEasyTMKifaa cha Moja kwa Moja cha RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
Vipengele vya kit Mfumo wa Utendaji wa qPCR 20μl | DRT-01021 | DRT-01022 | Kumbuka | |
200 T | 1000 T | |||
Sehemu I | Bafa CL | 4 ml | 20 ml | Lysis ya seli |
Foregene Protease Plus II | 80 μl | 400 μl | ||
Bafa ST | 400 μl | 1 ml × 2 | ||
Sehemu II | Kifutio cha DNA | 80 μl | 400 μl | |
5×Mchanganyiko wa RT wa moja kwa moja * | 160 μl | 800 μl | RT | |
2× Moja kwa moja qPCR Mix-Taqman * | 1 ml × 2 | 1.7 ml × 6 | qPCR | |
20×ROX Reference Dye | 40 μl | 200 μl | ||
RNase-Free ddH2O | 1.7 ml | 10 ml | ||
Mwongozo wa Maagizo | kipande 1 | kipande 1 |
*:Cell Lysis, 5×Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman inaweza kununuliwa kando.
Vipengele&faida
■Rahisi na bora : kwa kutumia teknolojia ya Cell Direct RT, sampuli za RNA zinaweza kupatikana kwa dakika 7 pekee.
■ Sampuli ya mahitaji ni ndogo, hadi seli 10 zinaweza kujaribiwa.
■ Utoaji wa juu: inaweza kutambua kwa haraka RNA katika seli zilizokuzwa katika sahani 384, 96, 24, 12, 6 za visima.
■ Kifutio cha DNA kinaweza kuondoa haraka jenomu zilizotolewa, kupunguza kwa kiasi kikubwa athari kwenye matokeo ya majaribio yanayofuata.
■ Mfumo wa RT na qPCR ulioboreshwa hufanya unukuzi wa RT-PCR wa hatua mbili kuwa bora zaidi na PCR mahususi zaidi, na sugu zaidi kwa vizuizi vya majibu ya RT-qPCR.
Programu ya kit
Upeo wa maombi: seli za utamaduni.
- RNA iliyotolewa kwa sampuli ya uchanganuzi: inatumika tu kwa kiolezo cha RT-qPCR cha kifaa hiki.
- Seti hii inaweza kutumika kwa madhumuni yafuatayo: uchanganuzi wa usemi wa jeni, uthibitishaji wa athari ya kunyamazisha jeni ya siRNA, uchunguzi wa dawa, n.k.
Uhifadhi na maisha ya rafu
Sehemu ya I ya kit hii inapaswa kuhifadhiwa saa 4℃;Sehemu ya II inapaswa kuhifadhiwa kwa -20 ℃.
Foregene Protease Plus II inapaswa kuhifadhiwa saa 4℃, usigandishe ifikapo -20℃.
Wakala 2×Direct qPCR Mix-Taqman inapaswa kuhifadhiwa saa -20℃katika giza;ikiwa inatumiwa mara kwa mara, inaweza pia kuhifadhiwa saa 4℃ kwa hifadhi ya muda mfupi (tumia ndani ya siku 10).
Kanuni za muundo wa primer ya Muda Halisi ya PCR
Sambaza Kitangulizi na Kitangulizi cha Nyuma
Kwa PCR ya Wakati Halisi, muundo wa primer ni muhimu sana.Viunzilishi vinahusiana na umaalum na ufanisi wa ukuzaji wa PCR, na vinaweza kuundwa kwa kuzingatia kanuni zifuatazo:
- Urefu wa primer: 18-30bp.
- Maudhui ya GC: 40-60%.
- Thamani ya Tm: Programu ya usanifu wa primer, kama vile Primer 5, inaweza kutoa thamani ya Tm ya kitangulizi.Thamani za Tm za vianzilishi vya juu na chini zinapaswa kuwa karibu iwezekanavyo.Fomula ya hesabu ya Tm pia inaweza kutumika: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Wakati wa kutekeleza PCR, halijoto iliyo chini ya thamani ya primer Tm ya 5 °C kwa ujumla huchaguliwa kama halijoto ya kuchuja (ongezeko linalolingana la halijoto ya kuchubua kunaweza kuongeza umaalum wa mmenyuko wa PCR).
- Primers na bidhaa za PCR:
- Urefu wa bidhaa ya ukuzaji wa kitangulizi cha PCR ni ikiwezekana 100-150bp.
- Vipimo vya uundaji katika eneo la sekondari la muundo wa kiolezo vinapaswa kuepukwa iwezekanavyo.
- Epuka uundaji wa besi 2 au zaidi zinazosaidiana kati ya ncha 3′ za vianzio vya juu na vya chini vya mkondo.
- Msingi wa msingi wa 3′ hauwezi kuwepo na G au C 3 za ziada mfululizo.
- The primers wenyewe hawezi kuwa na miundo ya ziada, vinginevyo muundo wa hairpin utaundwa, unaoathiri amplification ya PCR.
- ATCG inapaswa kusambazwa kwa usawa iwezekanavyo katika mfuatano wa kwanza, na msingi wa 3′ unapaswa kuepukwa kama T.
Nyongeza1:Cmoja kwa mojaRT-qPCR Sehemu ya vifaat nyongeza pakiti
1.Kiini Lysis Solution
Suluhisho la Lysis ya seli | |||
Vipengele vya kit (mfumo wa 24 wa kisima / kisima) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
100 T | 500 T | ||
SehemuI | Bafa CL | 20 ml | 100 ml |
Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
Bafa ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
SehemuII | Kifutio cha DNA | 400 μl | 1 ml × 2 |
Mchanganyiko wa RT | |
Vipengele vya kit (Mfumo wa majibu ya 20 μl) | DRT-01011-B1 |
200 T | |
5× Mchanganyiko wa RT wa moja kwa moja | 800 μl |
RNase-Free ddH2O | 1.7 ml × 2 |
Mchanganyiko wa qPCR | ||
Vipengele vya kit (Mfumo wa majibu ya 20 μl) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
200 T | 1000 T | |
2× Moja kwa moja qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1.7 ml × 6 |
20× ROX Reference Dye | 40 μl | 200 μl |
RNase-Free ddH2O | 1.7 ml | 10 ml |
Miongozo ya Maagizo: