Seti ya Kutenga ya RNA ya mmea Plus Jumla ya Kifurushi cha RNA cha Purificaiton cha Mimea Tajiri katika Polysaccharides na Polyphenols
Maelezo ya Kiti:
Cat.No.RE-05021/05022/05024
Kwa ajili ya utakaso wa jumla ya RNA kutoka kwa sampuli za mimea ya jumla iliyo na polysaccharide ya juu na vipengele vya polyphenol.
Kwa haraka toa jumla ya RNA ya ubora wa juu kutoka kwa sampuli za mimea zilizo na maudhui ya juu ya polisakaridi na poliphenoli.
Haina RNase Kwa Kutumia Safu Wima ya Kusafisha DNA
Rahisi-shughuli zote zinakamilika kwa joto la kawaida
Haraka - operesheni inaweza kukamilika kwa dakika 30
Salama-hakuna kitendanishi kikaboni kinachotumiwa 
Vipimo
Maandalizi 50, Maandalizi 200
Seti hii hutumia safu wima na fomula iliyotengenezwa na Foregene, ambayo inaweza kutoa RNA ya hali ya juu na ubora wa juu kutoka kwa tishu mbalimbali za mimea zilizo na polisakaridi au poliphenoli nyingi.Inatoa safu ya Usafishaji wa DNA ambayo inaweza kuondoa DNA ya jeni kwa urahisi kutoka kwa nguvu kuu na lysate ya tishu.Safu wima ya RNA pekee inaweza kuunganisha RNA kwa ufanisi.Seti inaweza kusindika idadi kubwa ya sampuli kwa wakati mmoja.
Mfumo mzima hauna RNase, hivyo RNA iliyosafishwa haitaharibika.Buffer PRW1 na Buffer PRW2 zinaweza kuhakikisha kuwa RNA inayopatikana haijachafuliwa na protini, DNA, ayoni, na misombo ya kikaboni.
Vipengele vya kit
| Buffer PSL1, Buffer PS, Buffer PSL2 |
| Buffer PRW1, Buffer PRW2 |
| RNase-Free ddH2O, Safu wima ya Kusafisha DNA |
| Safu wima ya RNA Pekee |
Vipengele&faida
■ Operesheni kwenye joto la kawaida (15-25℃) katika mchakato mzima, bila umwagaji wa barafu na uingizaji hewa wa joto la chini.
■ Seti kamili ya RNase-Free, hakuna haja ya kuwa na wasiwasi kuhusu uharibifu wa RNA.
■ Inafaa hasa kwa utakaso wa RNA kutoka kwa sampuli za mimea za polysaccharides na polyphenols.
■ Safu ya Kusafisha DNA hufungamana na DNA mahususi, ili kifaa kiweze kuondoa uchafuzi wa DNA ya jeni bila kuongeza DNase.
■ Mavuno ya juu ya RNA: Safu wima ya RNA pekee na fomula ya kipekee inaweza kusafisha RNA kwa ufasaha.
■ Kasi ya haraka: rahisi kufanya kazi na inaweza kukamilika ndani ya dakika 30.
■ Usalama: hakuna kitendanishi kikaboni kinachohitajika.
■ Ubora wa juu: Vipande vya RNA vilivyosafishwa ni vya usafi wa juu, visivyo na protini na uchafu mwingine, na vinaweza kukidhi matumizi mbalimbali ya majaribio ya chini ya mkondo.
Vigezo vya bidhaa
■ Programu za mkondo wa chini: usanisi wa cDNA wa safu ya kwanza, RT-PCR, upangaji wa molekuli, Blot ya Kaskazini, nk.
■ Sampuli: Tishu za mimea safi au zilizogandishwa za polysaccharides na polyphenols
■ Kipimo: 50mg tishu za mimea
■ Upeo wa uwezo wa kumfunga RNA wa safu wima ya utakaso: 80 μg
■ Kiasi cha elution: 50-200 μl
Programu ya kit
Inafaa kwa ajili ya uchimbaji na utakaso wa jumla wa RNA kutoka kwa sampuli za tishu za mimea safi au zilizogandishwa (hasa tishu za majani ya mmea) na maudhui ya juu ya polysaccharide na polyphenoli.
Mtiririko wa kazi
Mchoro
Plant Total RNA Isolation Kit Plus ilichakatwa 50mg ya majani mapya ya polysaccharides na polyphenols, na 5% iliyosafishwa RNA ilijaribiwa na electrophoresis.
1: Ndizi
2: Ginkgo
3: Pamba
4: komamanga
Uhifadhi na maisha ya rafu
Seti hii inaweza kuhifadhiwa kwa muda wa miezi 24 chini ya hali kavu kwenye joto la kawaida (15-25 ℃);ikiwa inahitaji kuhifadhiwa kwa muda mrefu zaidi, inaweza kuhifadhiwa katika 2-8 ℃.
Buffer PSL1 inaweza kuwekwa 4℃ kwa mwezi 1 baada ya kuongeza β-mercaptoethanol (inapendekezwa kuiongeza wakati huo huo wa majaribio).
Safu wima imechomekwa
Baada ya safu kuziba, mavuno ya RNA yamepunguzwa au hata haiwezekani kutakasa RNA, na molekuli ya RNA iliyopatikana ni ya chini.
Uchambuzi wa sababu za kawaida:
1. Mapumziko ya sampuli sio kamili.
Kuvunjika kwa sampuli hakusababishi kabisa SAFU YA DNA-CLEANING kuzuiwa, huku kukiathiri mavuno na ubora wa RNA.Tunapendekeza operesheni ya kusaga haraka katika nitrojeni kioevu ya kutosha wakati umevunja sampuli, Jaribu kuponda sampuli ya ukuta wa seli, membrane ya seli na tishu nyingine.Kwa sampuli za mimea ya polysaccharides ya polyol, tunapendekeza kwamba utumie Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.
2. Unapofyonza sampuli ya nguvu kuu iliyotenganishwa kwa Safu wima ya Kusafisha ya DNA, mvua inayoweza kugawanywa ya seli inaweza kuvuta pumzi.
Mashapo ya seli yaliyogawanyika yatasababisha Safu ya RNA-TU ambayo itazuiwa wakati operesheni ya utangazaji ya RNA inapofanywa (angalia hatua ya 6).Tunapendekeza kwa uangalifu unapofyonza dawa hii ili kuepuka uchafu wa seli kufyonzwa.
3. Sampuli ya kiasi cha awali ni nyingi sana.
Utumiaji mwingi wa sampuli utasababisha mgawanyiko usio kamili wa sampuli au uchanganuzi usio kamili wa seli na Buffer PSL1, na kusababisha kuziba kwa safu wima ya utakaso wakati wa utakaso.Seti ya Kutenga ya Jumla ya RNA ya mmea Kila sampuli moja ya uendeshaji iliyosafishwa ni miligramu 50.Kwa sampuli za mimea ya polysaccharides ya polyol, tunapendekeza kwamba ujaribu Plant Total RNA ISLATION KIT PLUS.
4. Joto la centrifuge ni la chini sana.
Mchakato mzima wa kutengwa na utakaso wa RNA unafanywa kwa joto la kawaida (20-25°C), isipokuwa sampuli ya tishu imevunjwa na nitrojeni kioevu. Joto la baadhi ya centrifuge za cryogenic ni chini ya 20.℃, ambayo inaweza kusababisha kuziba kwa Safu ya DNA-Kusafisha na/au Safu ya RNA Pekee.Ikiwa hii itatokea, weka joto la centrifuge hadi 20-25℃, nahakikisha mchanganyiko wa lysis na/au kiongeza nguvu cha ethanol kimepashwa joto hadi 37°C.
Hakuna RNA iliyotolewa au mavuno ya RNA ni ya chini
Kwa kawaida kuna mambo mengi yanayoathiri ufanisi wa uokoaji, kama vile: sampuli ya maudhui ya RNA, njia ya uendeshaji, kiasi cha elution, n.k.
Uchambuzi wa sababu za kawaida kama hizi:
1.Bafu ya barafu au joto la chini (4 ° C) centrifugation ilifanyika wakati wa operesheni.
Pendekezo: Fanya kazi kwenye joto la kawaida (15-25°C) katika mchakato mzima, usifanye umwagaji wa barafu na centrifugation ya joto la chini.
2.RNA imeharibiwa kutokana na uhifadhi usiofaa wa sampuli au uhifadhi wa muda mrefu wa sampuli.
Pendekezo: Sampuli mpya zilizokusanywa zinapaswa kugandishwa haraka kwenye nitrojeni kioevu, na kisha zihifadhiwe kwa -80°C kwa muda mrefu, ziepuke kugandisha mara kwa mara na kuyeyusha sampuli;au mara moja loweka sampuli kwenye suluhisho la RNAlater la kiimarishaji cha RNA (sampuli za wanyama).
3.Kugawanyika kwa sampuli haitoshi na lysis husababisha kuzuia safu ya utakaso.
Pendekezo: Unaposaga tishu, tafadhali hakikisha kwamba tishu zimesagwa vya kutosha, na uhamishe kwa haraka hadi Buffer PSL1 iliyotayarishwa awali (thibitisha kwamba sehemu sahihi ya β-ME imeongezwa, angalia hatua ya 1 ya utaratibu).
4.Kielelezo kiliongezwa kimakosa.
Pendekezo: Hakikisha kuwa RNase-Free ddH2O imedondoshwa katikati ya utando wa safu wima ya utakaso.
5.Kiasi sahihi cha ethanoli kabisa hakikuongezwa kwenye Buffer PSL2 au Buffer PRW2.
Pendekezo: Tafadhali fuata maagizo, ongeza kiasi sahihi cha ethanoli kabisa kwenye Buffer PSL2 na Buffer PRW2 na uchanganye vizuri kabla ya kit kutumika.
6.Kiasi cha sampuli ya tishu hakifai.
Pendekezo: Tumia miligramu 50 za tishu kwa kila 500 μl ya Buffer PSL1.Kutumia tishu nyingi kutapunguza kiasi cha RNA kilichotolewa na usafi wa RNA inayosababisha pia itapungua.Tunapendekeza sana kwamba kipimo cha awali cha sampuli haipaswi kuzidi miligramu 50 kwa kila operesheni ya uchimbaji wa RNA.
7.Kiasi cha sauti kisichofaa au upotoshaji usio kamili.
Pendekezo: Kiasi kisichojulikana cha safu ya utakaso ni 50-200 μl;ikiwa athari ya elution hairidhishi, inashauriwa kuongeza muda kwenye joto la kawaida baada ya kuongeza ddH2O isiyo na joto ya RNase-Free, kama vile 5-10min.
8.Safu ya utakaso ina mabaki ya ethanoli baada ya kuosha na BufferPRW2.
Pendekezo: Iwapo bomba tupu limetiwa kipenyo kwa dakika 1 na bado kuna ethanoli iliyobaki baada ya kuosha katika Buffer PRW2, unaweza kuongeza muda wa mrija tupu wa kupenyeza hadi dakika 2, au uweke safu wima ya utakaso kwenye joto la kawaida kwa dakika 5 ili kuondoa kabisa ethanoli iliyobaki.
9.Kiti kilitumika kimakosa.
Pendekezo: Kwa sampuli za mimea ya poliphenolic polisakaridi, kutumia vifaa vya kawaida kama vile Plant Total RNA Isolation Kit huenda isiweze kupata sampuli bora za RNA.Tunapendekeza utumie Plant Total RNA IsolationKit Plus, ambayo imeundwa mahususi kwa sampuli za mimea ya polysaccharide polyphenolic.Seti iliyotengenezwa mahususi kwa ajili ya kuchimba RNA kutoka kwa sampuli za mimea ya polyphenol na polysaccharide.
Thamani ya OD260/OD280 ni ya chini
Uchanganuzi wa RNA wenye ddH2O na unaotumika kwa usomaji wa spectrophotometer husababisha viwango vya chini vya OD260/OD280.Tunapendekeza utumie 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 (badala ya RNase-Free ddH2O kufafanua RNA) ili kupata thamani zilizo sahihi kiasi za OD260/OD280, angalia “Uchambuzi wa Uzingatiaji na Usafishaji wa RNA” kwenye ukurasa wa 19.
RNA iliyosafishwa imeharibika
Ubora wa RNA iliyosafishwa unahusiana na mambo kama vile uhifadhi wa sampuli, uchafuzi wa RNase, na upotoshaji.
Uchambuzi wa sababu za kawaida:
1.Sampuli za tishu hazikuhifadhiwa kwa wakati baada ya kukusanywa.
Pendekezo: Iwapo sampuli za tishu hazitatumika kwa wakati baada ya kukusanywa, tafadhali zihifadhi kwenye nitrojeni kioevu kwenye joto la chini mara moja au zihamishe hadi -80°C kwa hifadhi ya muda mrefu baada ya kuganda kwa haraka katika nitrojeni kioevu, au tumbukiza sampuli hizo mara moja kwenye kiimarishaji cha RNA cha RNAlater solution (sampuli za wanyama ).Kwa uchimbaji wa RNA, jaribu kutumia sampuli mpya za tishu zilizokusanywa.
2.Kugandisha mara kwa mara na kuyeyusha sampuli za tishu.
Pendekezo: Wakati wa kuhifadhi sampuli za tishu, ni bora kuzikata vipande vidogo kwa ajili ya kuhifadhi, na kuchukua sehemu yao wakati wa kuzitumia ili kuepuka uharibifu wa RNA unaosababishwa na kufungia mara kwa mara na kuyeyusha sampuli.
3.RNase huletwa kwenye chumba cha upasuaji au glavu za kutupwa, masks, nk.
Pendekezo: Majaribio ya uchimbaji wa RNA hufanywa vyema zaidi katika shughuli tofauti za RNA, na jedwali la maabara linapaswa kusafishwa kabla ya jaribio, na glavu na vinyago vya kutupwa vinapaswa kuvaliwa wakati wa jaribio ili kuepuka uharibifu wa RNA unaosababishwa na kuanzishwa kwa RNase kwa kiwango kikubwa zaidi.
4.Kitendanishi kimechafuliwa na RNase wakati wa matumizi.
Pendekezo: Badilisha kwa mfululizo mpya wa vifaa vya uchimbaji vya RNA vya jumla vya mmea kwa majaribio yanayohusiana.
5.Mirija ya centrifuge na vidokezo vya pipette vinavyotumika kwa upotoshaji wa RNA vimechafuliwa na RNase.
Pendekezo: Hakikisha kwamba mirija ya katikati, vidokezo vya bomba, bomba, n.k. zinazotumika katika uchimbaji wa RNA zote hazina RNase.
Miongozo ya Maagizo:
Mwongozo wa Maagizo ya Jumla ya Kitengo cha RNA cha Kutengwa kwa mimea
