Miongozo ya uchambuzi wa shida

The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。

Hakuna RNA inayoweza kutolewa au mavuno ya asidi ya nucleic ni ya chini

Kwa kawaida kuna mambo mengi yanayoathiri ufanisi wa urejeshaji, kama vile: sampuli ya maudhui ya RNA, njia ya uendeshaji, sauti ya kufafanua, n.k..

Uchambuzi wa sababu za kawaida:

1. Umwagaji wa barafu au joto la chini (4 ° C) centrifugation wakati wa operesheni.

Pendekezo: Joto la chumba (15-25 ° C) operesheni, kamwe umwagaji wa barafu na centrifuge ya joto la chini.

2. Uhifadhi usiofaa wa sampuli au uhifadhi wa sampuli kwa muda mrefu sana.

Pendekezo: Hifadhi sampuli kwa -80 ° C au zigandishe kwenye nitrojeni ya kioevu, na uepuke matumizi ya kufungia mara kwa mara;jaribu kutumia sampuli mpya zilizokusanywa kwa uchimbaji wa RNA.

3.Uchambuzi wa sampuli usiotosha

Pendekezo: Tafadhali hakikisha kwamba sampuli na suluhisho la kufanya kazi (Linear Acrylamide) vimechanganywa vizuri na kuangaziwa kwa dakika 10 kwenye joto la kawaida (15-25 ° C)

4. Kielelezo kiliongezwa kimakosa

Pendekezo: Hakikisha kuwa RNase-Free ddH2O imeongezwa katikati ya utando wa safu wima ya utakaso.

5.Kiasi kisichofaa cha ethanoli isiyo na maji katika Buffer viRW2

Pendekezo: Tafadhali fuata maagizo, ongeza kiasi sahihi cha ethanoli isiyo na maji kwenye Buffer viRW2 na uchanganye vizuri kabla ya kutumia kit.

6.Matumizi yasiyofaa ya sampuli.

Pendekezo: 200µl ya sampuli kwa 500μl ya Buffer viRL.Kiwango cha sampuli kupita kiasi kitasababisha kupunguza kasi ya uchimbaji wa RNA.

7.Ujazo usiofaa wa kufichua au ufinyu usio kamili.

Pendekezo: Kiasi kisichojulikana cha safu ya utakaso ni 30-50μl;ikiwa athari ya elution hairidhishi, inashauriwa kuongeza ddH isiyo na joto ya RNase-Free.₂O na kuongeza muda wa kuweka kwenye joto la kawaida, kama vile 5-10min

8. Safu wima ya utakaso ina mabaki ya ethanoli baada ya kusuuza kwenye Buffer viRW2.

Pendekezo: Iwapo ethanoli bado itasalia baada ya kusuuza katika Buffer viRW2 na upenyezaji wa mirija tupu kwa dakika 2, safu wima ya utakaso inaweza kuachwa kwenye joto la kawaida kwa dakika 5 baada ya kupenyeza kwa mrija tupu ili kuondoa kikamilifu ethanoli iliyobaki.

Uharibifu wa molekuli za RNA zilizosafishwa

Ubora wa RNA iliyosafishwa unahusiana na vipengele kama vile hifadhi ya sampuli, uchafuzi wa RNase na uendeshaji.

Uchambuzi wa sababu za kawaida:

1.Sampuli zilizokusanywa hazikuhifadhiwa kwa wakati.

Pendekezo: Ikiwa sampuli haitatumiwa kwa wakati baada ya kukusanywa, tafadhali ihifadhi kwa -80 ℃ au nitrojeni kioevu mara moja.Kwa uchimbaji wa molekuli za RNA, jaribu kutumia sampuli mpya zilizokusanywa kila inapowezekana.

2.Sampuli zilizokusanywa zilikuwa zikiganda na kuyeyushwa mara kwa mara.

Pendekezo: Epuka kufungia mara kwa mara na kuyeyusha (si zaidi ya mara moja) wakati wa kukusanya na kuhifadhi sampuli, vinginevyo mavuno ya asidi ya nucleic yatapungua.

3.RNase ilianzishwa katika chumba cha uendeshaji au hakuna glavu za kutosha, masks, nk.

Pendekezo: Uchimbaji wa jaribio la molekuli za RNA hufanywa vyema zaidi katika chumba tofauti cha utendakazi cha RNA, na jedwali la majaribio husafishwa kabla ya jaribio.Vaa glavu na vinyago vinavyoweza kutupwa wakati wa jaribio ili kuepuka uharibifu wa RNA unaosababishwa na utangulizi wa RNase.

4.Kitendanishi kimechafuliwa na RNase wakati wa matumizi.

Pendekezo: Badilisha na Viral RNA Isolation Kit mpya kwa majaribio yanayohusiana.

5. Uchafuzi wa RNase wa mirija ya katikati, vidokezo vya bomba, n.k. Pendekezo: Hakikisha kwamba mirija ya katikati, vidokezo vya bomba, na bomba zote hazina RNase.

Molekuli za RNA zilizosafishwa ziliathiri majaribio ya chini ya mkondo

Molekuli za RNA zilizosafishwa kwa safu wima ya utakaso zitaathiri majaribio ya mkondo wa chini ikiwa kuna ayoni au protini nyingi za chumvi, kama vile: unukuzi wa kinyume, Northern Blot, n.k..

1.Kuna ioni za chumvi zilizosalia katika molekuli za RNA zilizotolewa.

Pendekezo: Hakikisha kwamba kiasi sahihi cha ethanoli isiyo na maji kimeongezwa kwenye Buffer viRW2, na uoshe safu ya utakaso mara mbili kulingana na kasi sahihi ya kupenyeza kwenye maagizo ya uendeshaji; Ikiwa bado kuna ioni za chumvi zilizobaki, unaweza kuongeza Buffer viRW2 kwenye safu ya utakaso, na kuiacha kwenye joto la kawaida kwa dakika 5.Kisha fanya centrifugation ili kuondoa uchafuzi wa ioni za chumvi kwa kiwango kikubwa

2.Kuna ethanoli iliyobaki katika molekuli za RNA zilizotolewa

Pendekezo: mara tu unapothibitisha kuwa safu wima za utakaso zimeoshwa na Buffer viRW2, fanya uingizaji hewa wa bomba tupu kulingana na kasi ya centrifugal kwenye maagizo ya uendeshaji.Ikiwa bado kuna ethanol iliyobaki, inaweza kushoto kwa dakika 5 kwa joto la kawaida baada ya centrifugation ya tube tupu ili kuondoa ethanol iliyobaki kwa kiwango kikubwa zaidi.

Miongozo ya Maagizo:

Mwongozo wa Maagizo ya Vifaa vya Kutengwa vya RNA ya Virusi