Uwiano wa chini wa A260/A230 kawaida husababishwa na uchafu na upeo wa urefu wa kunyonya wa 230nm.Wacha tuone uchafu huu unajumuisha nini:

• Vichafuzi vya kawaida	Urefu wa mawimbi ya kunyonya	Athari ya uwiano
  Protini	~230nm na 280nm	Kupunguza wakati huo huo A260/A 280na A260/A 280uwiano
  Chumvi ya Guanidine	220-240 nm	Kupunguza A260/A 280uwiano
  Phenoli	~270nm	-
  Trizol	~230nm na 270nm	Kupunguza A260/A 280uwiano
  EDTA	~230nm	Kupunguza A260/A 280uwiano
  Ethanoli	230-240 nm	Kupunguza A260/A 280uwiano

 
 
 
Urefu wa mawimbi ya kunyonya na thamani ya utofautishaji ya vichafuzi vya kawaida

Puchafuzi wa rotein
Uchafuzi wa protini unaweza kuzingatiwa kama uchafuzi wa kawaida katika mchakato wa uchimbaji wa asidi ya nucleic.Protini ipo kati ya awamu ya juu ya maji na ya chinikikaboniawamu.Uchafuzi utapunguza uwiano wa A260/A280 na A260/A230 kwa wakati mmoja, na uwiano wa A260/A230 utabadilika kwa uwazi zaidi kuliko uwiano wa A260/A280.
Wakati wa baadaeunukuzi wa kinyumeor majibu ya qPCR, mabaki ya protini yanaweza kuzuia au kuingilia kazi ya enzyme.Njia bora ya kuepuka uchafuzi wa protini ni kukumbuka kanuni ya "badala ya chini ya zaidi, kiasi kidogo mara nyingi" wakati wa kutamani supernatant.

2. Uchafuzi wa Guanidinium
hidrokloridi (GuHCl) na guanidine thiocyanate (GTC) zina athari ya protini denaturing, ambayo inaweza kuharibu haraka utando wa seli wakati wa mchakato wa uchimbaji wa asidi ya nukleiki, na kusababisha kubadilika kwa protini na kunyesha.Urefu wa wimbi la kunyonya la GuHCl na GTC ni kati ya 220-240 nm, namabaki ya chumvi ya guanidinium itapunguza uwiano wa A260/A230.Ingawa chumvi iliyobaki ya guanidinium itapunguza uwiano,athari kwa majaribio ya mkondo kwa kweli ni kidogo.

3. Ukolezi wa Trizol
Sehemu kuu ya Trizol ni phenol.Kazi kuu ya phenol ni lyse seli na kutolewa protini na dutu nucleic asidi katika seli.Ingawa phenoli inaweza kubadilisha protini kwa ufanisi, haiwezi kuzuia kabisa shughuli za RNase.Kwa hiyo, 8 -hydroxyquinoline, guanidine isothiocyanate, β-mercaptoethanol, nk huongezwa kwa TRIzol ili kuzuia RNase endogenous na exogenous.
Wakati wa kutoa RNA ya seli, Trizol inaweza kusambaza seli kwa haraka na kuzuia nyuklia iliyotolewa kutoka kwa seli, na Trizol iliyobaki itapunguza kwa kiasi kikubwa uwiano wa A260/A230.
Njia ya usindikaji: Wakati centrifuging, ni lazima ieleweke kwamba phenol katika Trizol ni rahisi mumunyifu katika awamu ya maji chini ya hali ya 4 ° na joto la kawaida.

4. Mabaki ya ethanoli
Ethanoli hutumiwa katika mchakato wa mwisho wa kuharakisha DNA wakati wa kuyeyusha ioni za chumvi ambazo zinaweza kushikamana na DNA.Urefu wa wimbi la juu zaidi la kunyonyakilele cha kunyonyaethanol pia iko kwenye 230-240 nm, ambayopia itapunguza uwiano wa A260/A230.
Njia ya kuepuka mabaki ya ethanol inaweza kurudiwa mara mbili wakati wa mwisho wa elution, kupiga ndanikofia ya moshikwa dakika mbili ili kuruhusu ethanoli kuyeyuka kikamilifu kabla ya kuongeza bafa kwa ajili ya elution.
Hata hivyo, inapaswa kujulikana kuwa uwiano ni fahirisi tu ya tathmini ya ubora wa RNA.Ikiwa shughuli zilizotajwa hapo juu zitadhibitiwa kwa uangalifu, mkengeuko kati ya uwiano na masafa ya kawaida hautakuwa na athari kubwa kwenye majaribio ya mkondo wa chini.
Bidhaa Zinazohusiana:
Seti ya Kutengwa kwa RNA ya Wanyama
Seti ya Kutengwa ya Jumla ya RNA ya mmea
Seli Jumla ya vifaa vya Kutengwa vya RNA
Plant Total RNA Isolation kit Plus