Kuzaa kwa vidokezo vya pipette na zilizopo za EP, nk.
1. Tayarisha 0.1% (elfu moja) DEPC (dutu yenye sumu kali) na maji yaliyotengwa, itumie kwa uangalifu kwenye kofia ya mafusho, na uihifadhi kwa 4 ° C mbali na mwanga;
Maji ya DEPC ni maji safi yaliyotibiwa na DEPC na kusafishwa kwa joto la juu na shinikizo la juu.Ilijaribiwa kuwa haina RNase, DNase na proteinase.
2. Weka ncha ya pipette na EP tube ndani ya 0.1% DEPC, na uhakikishe kuwa ncha ya pipette na tube ya EP imejaa 0.1% DEP.
3. Jilinde na mwanga, wacha usimame usiku kucha (saa 12-24)
4. Kisanduku kilicho na ncha na bomba la EP halihitaji kulowekwa kwenye DEPC.Baada ya kuondoa takriban maji ya DEPC kwenye ncha au bomba la EP, ifunge na uifunge.
5. nyuzi joto 121, 30min
6. nyuzi joto 180, kavu kwa saa kadhaa (angalau saa 3)
Kumbuka: a.Vaa glavu za mpira na vinyago wakati wa kushughulikia DEPC!b, au bila kutoweka kwa DEPC, 130 ℃, 90min autoclave (maabara nyingi za kudhibiti joto la juu mara mbili)
Mazingatio ya uchimbaji wa RNA
Matukio mawili makuu ya kutofaulu kwa kutengwa kwa tishu RNA
Uharibifu wa RNA na mabaki ya uchafu kwenye tishu,kuhusu uharibifu, hebu kwanza tuangalie ni kwa nini RNA inayotolewa kutoka kwa seli zilizokuzwa haiharibiki kwa urahisi.Vitendanishi vya uchimbaji vya RNA vilivyopo vyote vina vijenzi ambavyo huzuia RNase kwa haraka.Ongeza lysate kwa seli zilizopandwa, na kuchanganya tu, seli zote zinaweza kuchanganywa kabisa na lysate, na seli zimepigwa kabisa.Baada ya seli ni lysed, viungo kazi katika lysate mara moja kuzuia RNase intracellular, hivyo RNA bado intact.Hiyo ni kusema, kwa sababu seli za utamaduni zinawasiliana kwa urahisi na kikamilifu na lysate, RNA yao haiharibiki kwa urahisi;kwa upande mwingine, RNA katika tishu huharibika kwa urahisi kwa sababu seli za tishu si rahisi kuwasiliana haraka na lysate.kutokana na mawasiliano ya kutosha.Kwa hiyo,ikizingatiwa kuwa kuna njia ya kugeuza tishu kuwa seli moja huku ikizuia shughuli za RNA, tatizo la uharibifu linaweza kutatuliwa kabisa.
Usagaji wa nitrojeni kioevu ndio njia bora zaidi kama hiyo.Hata hivyo, njia ya kusaga nitrojeni ya kioevu ni ya shida sana, hasa wakati idadi ya sampuli ni kubwa.Hii ilisababisha jambo bora zaidi: homogenizer.ThehomogenizerMbinu haizingatii swali la jinsi shughuli ya RNase inavyozuiwa kabla ya seli kuguswa na lisati, lakini inaomba kwamba kasi ya uharibifu wa tishu iwe haraka kuliko kiwango ambacho RNase ya ndani ya seli huharibu RN.
Athari ya homogenizer ya umeme ni bora,na athari ya homogenizer ya kioo ni duni, lakini kwa ujumla, njia ya homogenizer haiwezi kuzuia uzushi wa uharibifu.Kwa hiyo, ikiwa uchimbaji umeharibiwa, homogenizer ya awali ya umeme inapaswa kutumika kwa kusaga na nitrojeni kioevu;homogenizer ya awali ya kioo inapaswa kubadilishwa kwa homogenizer ya umeme au moja kwa moja kusaga na nitrojeni kioevu.Tatizo linawezekana kwa karibu 100%.kutatuliwa.
Tatizo la masalio ya uchafu linaloathiri majaribio yaliyofuata lina sababu tofauti zaidi kuliko uharibifu, na masuluhisho ni tofauti.Hitimisho,ikiwa kuna uharibifu au uchafu uliobaki kwenye tishu, mbinu ya uchimbaji/kitendanishi cha nyenzo mahususi ya majaribio lazima iboreshwe.Sio lazima utumie sampuli zako za thamani kwa ajili ya uboreshaji: unaweza kununua baadhi ya wanyama wadogo kama samaki/kuku kutoka sokoni, kuchukua sehemu inayolingana ya nyenzo kwa ajili ya uchimbaji wa RNA, na sehemu nyingine kwa ajili ya uchimbaji wa protini - saga kwa mdomo, tumbo na matumbo.
RNA inayolengwa ya RNA iliyotolewa hutumiwa kwa majaribio tofauti ya ufuatiliaji, na mahitaji yake ya ubora ni tofauti
Ujenzi wa maktaba ya cDNA unahitaji uadilifu wa RNA bila mabaki ya vizuizi vya mmenyuko wa enzyme;Kaskazini inahitaji uadilifu wa juu wa RNA na mahitaji ya chini kwa mabaki ya vizuizi vya mmenyuko wa kimeng'enya;RT-PCR haihitaji uadilifu wa juu sana wa RNA,lakini huzuia athari za enzyme.Mahitaji ya mabaki ni kali.Pembejeo huamua pato;kila wakati lengo ni kupata RNA ya juu kabisa ya usafi, itagharimu watu na pesa.
Ukusanyaji/Uhifadhi wa Sampuli
Mambo Yanayoathiri Uharibifu Baada ya sampuli kuondoka kwenye mwili hai/au mazingira ya awali ya ukuaji, vimeng'enya endojeni kwenye sampuli vitaanza kuharibu RNA,na kiwango cha uharibifu kinahusiana na maudhui ya vimeng'enya endogenous na joto.Kijadi, kuna njia mbili tu za kuzuia kabisa shughuli za enzyme endogenous: kuongeza lysate mara moja na homogenize kabisa na kwa haraka;kata vipande vidogo na mara moja kufungia katika nitrojeni kioevu.Njia zote mbili zinahitaji operesheni ya haraka.Mwisho unafaa kwa sampuli zote, wakati wa kwanza unafaa tu kwa tishu zilizo na maudhui ya chini ya seli na enzymes endogenous na rahisi kwa homogenize.Hasa, tishu za mmea, ini, thymus, kongosho, wengu, ubongo, mafuta, tishu za misuli, nk ni bora kugandishwa na nitrojeni kioevu kabla ya kuendelea.
Kugawanyika na homogenization ya sampuli
Mambo Yanayoathiri Uharibifu na Mgawanyiko wa Sampuli ya Mavuno nikwa homogenization kamili, ambayo ni ya kutolewa kamili na kamili ya RNA.Seli zinaweza kubadilishwa moja kwa moja bila kuvunjika.Tishu inaweza kuwa homogenized tu baada ya kuvunjwa.Chachu na bakteria zinahitaji kuvunjwa kwa vimeng'enya vinavyolingana kabla ya kubadilishwa kuwa homojeni.Tishu zilizo na kiwango cha chini cha kimeng'enya endojeni na upatanishi rahisi zaidi zinaweza kusagwa na kusawazishwa kwa wakati mmoja katika lilisati na homogenizer;tishu za mmea, ini, thymus, kongosho, wengu, ubongo, mafuta, tishu za misuli na sampuli zingine, zinaweza kuwa na vimeng'enya vingi vya asili au hazijabadilishwa kwa urahisi;hivyo usumbufu wa tishu na homogenization lazima ufanyike tofauti.Njia ya kuaminika na yenye tija zaidi ya kugawanyika ni kusaga na nitrojeni kioevu, na njia ya kuaminika zaidi ya homogenization ni matumizi ya homogenizer ya umeme.Dokezo maalum kuhusu kusaga na nitrojeni kioevu: sampuli lazima isiyeyushwe wakati wa mchakato mzima wa kusaga, kwani vimeng'enya asilia vina uwezekano mkubwa wa kufanya kazi zikigandishwa.
Uchaguzi wa lysate
Inaathiri urahisi wa utendakazi na mambo ya uchafu wa mabaki ya endojeni. Mifumbuzi ya lysis inayotumika sana inaweza karibu kuzuia shughuli ya RNase.Kwa hiyo, hatua muhimu ya kuchagua ufumbuzi wa lysis ni kuzingatia pamoja na njia ya utakaso.Kuna ubaguzi mmoja:sampuli zilizo na kiwango cha juu cha kimeng'enya endojeni zinapendekezwa kutumia lilisati iliyo na phenoli ili kuongeza uwezo wa kulemaza vimeng'enya endojeni.
Uchaguzi wa njia ya utakaso
Mambo yanayoathiri mabaki ya uchafu wa ndani, kasi ya uchimbaji Kwa sampuli safi kama vile seli, matokeo ya kuridhisha yanaweza kupatikana kwa karibu mbinu yoyote ya utakaso.Lakini kwa sampuli zingine nyingi, haswa zile zilizo na viwango vya juu vya uchafu kama vile mimea, ini, bakteria, nk, kuchagua njia inayofaa ya utakaso ni muhimu.Njia ya utakaso wa safu wima ina kasi ya uchimbaji haraka na inaweza kuondoa uchafu unaoathiri athari ya baadaye ya enzymatic ya RNA, lakini ni ghali (Forgene inaweza kutoa vifaa vya gharama nafuu, bofya maelezo zaidi.hapa);kutumia mbinu za utakaso za kiuchumi na za kitamaduni, kama vile kunyesha kwa LiCl, kunaweza pia kupata matokeo ya kuridhisha, lakini muda wa operesheni ni mrefu..
"Nidhamu Tatu na Makini Nane" kwa Uchimbaji wa RNA
Nidhamu ya 1:Komesha uchafuzi wa vimeng'enya vya exogenous.
Kumbuka 1:Vaa vinyago na glavu kabisa.
Kumbuka 2:Mirija ya centrifuge, vichwa vya ncha, fimbo za pipette, mizinga ya electrophoresis, na madawati ya majaribio yaliyohusika katika jaribio yanapaswa kutupwa kikamilifu.
Kumbuka 3:Vitendanishi/suluhisho zinazohusika katika jaribio, hasa maji, lazima zisiwe na RNase.
Nidhamu 2:Kuzuia shughuli za enzymes endogenous
Kumbuka 4:Chagua njia inayofaa ya homogenization.
Kumbuka 5:Chagua lysate inayofaa.
Kumbuka 6:Dhibiti kiasi cha kuanzia cha sampuli.
Nidhamu ya 3:Fafanua kusudi lako la uchimbaji
Kumbuka 7:Kwa mfumo wowote wa lysate unakaribia kiwango cha juu cha kuanzia cha sampuli, kiwango cha mafanikio ya uchimbaji hupungua sana.
Kumbuka 8:Kigezo pekee cha kiuchumi cha uchimbaji wa RNA uliofaulu ni mafanikio katika majaribio yaliyofuata, sio mavuno.
Vyanzo 10 Bora vya Uchafuzi wa RNase
1. Vidole ni chanzo cha kwanza cha vimeng'enya vya nje, hivyo glavu lazima zivaliwa na kubadilishwa mara kwa mara.Kwa kuongeza, masks lazima pia kuvaa, kwa sababu kupumua pia ni chanzo muhimu cha enzymes.Faida ya ziada ya kuvaa kinyago cha glavu ni kumlinda anayejaribu.
2. Vidokezo vya bomba, mirija ya centrifuge, pipettes - RNase haiwezi kuamilishwa kwa sterilization pekee, hivyo vidokezo vya pipette na mirija ya centrifuge inapaswa kutibiwa na DEPC, hata ikiwa ni alama ya DEPC iliyotibiwa.Ni bora kutumia pipette ya kusudi maalum, kuifuta kwa pamba ya pombe 75% kabla ya matumizi, hasa fimbo;kwa kuongeza, hakikisha usitumie mtoaji wa kichwa.
3. Maji/bafa lazima yasiwe na uchafuzi wa RNase.
4. Angalau meza ya mtihani inapaswa kufutwa na mipira 75% ya pamba ya pombe.
5.Endogenous RNase Tishu zote zina vimeng'enya endogenous, hivyo kuganda kwa haraka kwa tishu na nitrojeni kioevu ndiyo njia bora ya kupunguza uharibifu.Njia ya uhifadhi/kusaga nitrojeni kioevu kwa kweli si rahisi, lakini ndiyo njia pekee kwa tishu zilizo na viwango vya juu vya vimeng'enya endogenous.
6. Sampuli za RNA Bidhaa za uchimbaji wa RNA zinaweza kuwa na athari za uchafuzi wa RNase.
7. Uchimbaji wa Plasmidi Uchimbaji wa Plasmid mara nyingi hutumia Rnase kuharibu RNA, na Rnase iliyobaki inapaswa kusagwa kwa Proteinase K na kutolewa na PCI.
8. Hifadhi ya RNA Hata ikiwa imehifadhiwa kwenye joto la chini, fuatilia kiasi cha RNase itasababisha uharibifu wa RNA.Suluhisho bora kwa uhifadhi wa muda mrefu wa RNA ni kusimamishwa kwa chumvi / pombe, kwa sababu pombe huzuia shughuli zote za enzymatic kwa joto la chini.
9. Wakati cations (Ca, Mg) zina ioni hizi, inapokanzwa kwa 80C kwa dakika 5 itasababisha RNA kugawanyika, kwa hivyo ikiwa RNA inahitaji kuwashwa, suluhisho la kuhifadhi linahitaji kuwa na wakala wa chelating (1mM Sodium Citrate, pH 6.4).
10. Enzyme zinazotumiwa katika majaribio yajayo zinaweza kuchafuliwa na RNase.
Vidokezo 10 vya Uchimbaji wa RNA
1: Zuia shughuli za RNase kwa haraka.Sampuli hugandishwa haraka baada ya kukusanywa, na RNase imezimwa na operesheni ya haraka wakati wa lysis.
2: Chagua njia ifaayo ya uchimbaji kwa tishu zilizo na ribozimu ya juu, na tishu za adipose ni bora kutumia njia iliyo na fenoli.
3: Ubora wa utabiri unahitaji Kaskazini, ujenzi wa maktaba ya cDNA unahitaji uadilifu wa juu, na RT-PCR na RPA (Ribonuclease protection assay) hazihitaji uadilifu wa juu.RT-PCR inahitaji usafi wa juu (mabaki ya kizuizi cha enzyme).
4: Homogenization kamili ni ufunguo wa kuboresha mavuno na kupunguza uharibifu.
5: Angalia uadilifu wa ugunduzi wa RNA electrophoresis, 28S: 18S = 2: 1 ni ishara kamili, 1: 1 pia inakubalika kwa majaribio mengi.
6: Kuondolewa kwa DNA kwa RT-PCR, uchambuzi wa safu Ni bora kutumia Dnase I ili kuondoa DNA.
7: Punguza uchafuzi wa vimeng'enya vya nje - vimeng'enya haviwezi kuagizwa kutoka nje.
8: Wakati wa kuzingatia asidi ya nucleic ya chini ya mkusanyiko, reajenti ya mvua inapaswa kuongezwa.Lakini ili kuzuia precipitant iliyo na vimeng'enya na uchafuzi wa DNA.
9: Futa kabisa RNA, ikiwa ni lazima, joto kwa 65C kwa dakika 5.
njia inayofaa ya kuhifadhi
Inaweza kuhifadhiwa kwa -20C kwa muda mfupi, na -80C kwa muda mrefu.Hatua ya kwanza katika kuboresha mavuno ya RNA ni kutambua kwamba maudhui ya RNA ya sampuli tofauti hutofautiana sana.Kuongezeka kwa wingi (2-4ug/mg) kama vile ini, kongosho, moyo, wingi wa wastani (0.05-2ug/mg) kama vile ubongo, kiinitete, figo, mapafu, thymus, ovari, wingi mdogo (<0.05ug/mg) mg) kama vile kibofu cha mkojo, mfupa, mafuta.
1: seli za Lyse za kutolewa RN - ikiwa RNA haijatolewa, mavuno yatapungua.Uunganishaji wa umeme hufanya kazi vizuri zaidi kuliko mbinu zingine za urekebishaji homojeni, lakini pia unaweza kuhitaji kuunganishwa na mbinu zingine, kama vile kusaga nitrojeni kioevu, usagaji wa enzymatic (Lysozyme/Lyticase)
2: Uboreshaji wa njia ya uchimbaji.Matatizo makubwa zaidi ya mbinu za msingi wa phenoli ni utabaka usio kamili na upotevu wa sehemu ya RNA (supernatant haiwezi kuondolewa kabisa).Utabakishaji usio kamili unatokana na asidi ya nukleiki ya juu na maudhui ya protini, ambayo yanaweza kutatuliwa kwa kuongeza kiasi cha lysate kinachotumiwa au kupunguza kiasi cha sampuli.Hatua ya uchimbaji wa klorofomu iliongezwa kwenye tishu za adipose.Upotevu wa RNA unaweza kupunguzwa kwa kusukuma nyuma au kwa kuondoa safu ya kikaboni ikifuatiwa na upenyo.Shida kubwa ya mbinu za msingi za uwekaji safu wima ni sampuli ya ziada.
Vidokezo vya Uchimbaji wa Kawaida
1. Utakaso wa Phenol: Ongeza kiasi sawa cha 1: 1 Phenol / Chloroform na kuchanganya kwa nguvu kwa dakika 1-2.Centrifuge kwa kasi ya juu kwa dakika 2.Kuondoa kwa makini supernatant (80-90%).Kamwe usifikie safu ya kati.Kiasi sawa cha suluhisho la mmenyuko kinaweza kuongezwa kwa Phenol/Chloroform na ile ya kiangazi kuondolewa.Dawa hizi mbili za supernatant zinaweza kuchanganywa pamoja kwa ajili ya kunyesha kwa asidi nukleiki ili kuboresha mavuno.Usiwe mpole sana wakati wa kuchanganya, na usijaribu kuondoa supernatant yote.
2. Kuosha kwa ethanol 70-80%: Wakati wa kuosha, asidi ya nucleic lazima iahirishwe ili kuhakikisha kuwa chumvi iliyobaki imeoshwa.Wakati huo huo, mara baada ya kumwaga ethanol, centrifuge kwa kasi ya juu kwa sekunde chache, na kisha uondoe ethanol iliyobaki na pipette.Futa baada ya kusimama kwenye joto la kawaida kwa dakika 5-10.
11. Uchimbaji wa mashirika maalum
1. Tishu zenye nyuzi: Ufunguo wa kutoa RNA kutoka kwa tishu zenye nyuzi kama vile moyo/msuli wa mifupa ni kuvuruga tishu kabisa.Tishu hizi zina wiani mdogo wa seli, hivyo kiasi cha RNA kwa kila kitengo cha uzito wa tishu ni cha chini, na ni bora kutumia kiasi cha kuanzia iwezekanavyo.Hakikisha kusaga tishu vizuri chini ya hali ya kufungia.
2. Tishu zenye protini nyingi/mafuta: maudhui ya mafuta ya ubongo/mboga ni mengi.Baada ya uchimbaji wa PCI, supernatant ina floccules nyeupe.Dawa ya juu lazima itolewe tena na klorofomu.
3. Tishu zenye asidi ya juu ya nucleic/ribozyme: wengu/thymus ina asidi ya juu ya nucleic na maudhui ya ribozimu.Kusaga tishu chini ya hali ya kugandisha ikifuatiwa na upatanisho wa haraka wa homojeni kunaweza kuzima ribozimu.Hata hivyo, ikiwa lysate ni viscous sana (kutokana na maudhui ya juu ya asidi ya nucleic), uchimbaji wa PCI hautaweza kuimarisha kwa ufanisi;kuongeza lysate zaidi kunaweza kutatua suala hili.Uchimbaji wa PCI nyingi unaweza kuondoa DNA iliyobaki.Ikiwa mvua nyeupe hutokea mara baada ya kuongeza pombe, inaonyesha uchafuzi wa DNA.Uchimbaji upya kwa PCI yenye asidi baada ya kufutwa kunaweza kuondoa uchafuzi wa DNA.
4. Tishu za mimea: Tishu za mimea ni ngumu zaidi kuliko tishu za wanyama.Kwa ujumla, mimea husagwa chini ya hali ya nitrojeni ya kioevu, hivyo uharibifu wa RNA na vimeng'enya endogenous sio kawaida.Ikiwa tatizo la uharibifu halijatatuliwa, karibu hakika husababishwa na uchafu ulio katika sampuli.Uchafu uliomo katika mimea mingi utasababisha mabaki, na sababu ya mabaki mara nyingi ni kwa sababu uchafu huu una baadhi ya kufanana na RNA: wewe hupita na mimi hunyesha, na wewe hutangaza na mimi hutangaza.Tabia hizi huamua kuwa ni vizuizi vikali vya enzyme.
Kwa sasa, vitendanishi vya uchimbaji wa RNA vya kibiashara vinaweza kubadilishwa kwa karibu tishu zote za wanyama kwa marekebisho madogo, lakini kuna vitendanishi vichache vya uchimbaji wa RNA vya kibiashara ambavyo vinaweza kufaa kwa tishu nyingi za mmea.Kwa bahati nzuri, Foregene inaweza kutoa maalumpanda vifaa vya uchimbaji vya RNA, tunaSeti ya Kutengwa ya Jumla ya RNA ya mmea, Plant Total RNA Isolation kit Plus.Mwisho huo umeundwa mahsusi kwa mimea yenye polysaccharide ya juu na maudhui ya polyphenol.Kwa uchimbaji wa RNA, maoni kutoka kwa watumiaji wa maabara ni mazuri sana.
12. Athari ya sampuli kuganda na kuyeyusha Sampuli iliyogandishwa inaweza kuwa kubwa zaidi, na inahitaji kukatwa kabla ya kutumika kwa uchimbaji wa RNA.Sampuli huwa na kuyeyuka (ikiwezekana sehemu) wakati wa kukata.Sampuli zilizogandishwa zinaweza kuhitaji kupimwa kabla ya uchimbaji wa RNA, na kuyeyusha kutatokea wakati wa mchakato huu.Wakati mwingine, thawing ya sampuli pia hutokea wakati wa mchakato wa kusaga nitrojeni kioevu;au sampuli iliyogandishwa huongezwa moja kwa moja kwenye lysate bila kusaga nitrojeni kioevu, na kuyeyusha kutatokea kabla ya ujumuishaji kamili.Majaribio yameonyesha kuwa tishu zilizogandishwa huathirika zaidi na uharibifu wa RNA wakati wa kuyeyusha kuliko tishu mpya.Sababu inayowezekana: Mchakato wa kugandisha huvuruga miundo ndani ya seli, na kuifanya iwe rahisi kwa vimeng'enya endojeni kugusana moja kwa moja na RNA.
13. Hukumu ya ubora wa RNA Kawaida, electrophoresis hutumiwa kuhukumu uadilifu wa RNA, na A260 / A280 hutumiwa kuhukumu usafi wa RNA.Kwa nadharia, RNA isiyobadilika ina uwiano wa 28S:18S = 2.7:1, na data nyingi zinasisitiza uwiano wa 28S:18S = 2:1.Ukweli ni kwamba karibu hakuna RNA iliyotolewa kutoka kwa sampuli isipokuwa seli iliyo katika uwiano wa 2:1 (hii ilipatikana kwa kutumia Agilent Bioanalyzer).
Matokeo ya electrophoresis ya RNA huathiriwa na mambo mengi, ikiwa ni pamoja na muundo wa pili, hali ya electrophoresis, mzigo wa sampuli, kiwango cha kueneza kwa EB, nk. Tumia electrophoresis asili kugundua RNA na kutumia Alama ya DNA kama udhibiti.Ikiwa 28S kwa 2kb na 18S kwa 0.9kb ni wazi, na 28S: 18S > 1, uadilifu unaweza kukidhi mahitaji ya majaribio mengi yanayofuata.
A260/A280 ni kiashiria ambacho kimesababisha machafuko mengi.Kwanza kabisa, ni muhimu kufafanua maana ya awali ya kiashiria hiki kwa asidi ya nucleic: RNA safi, A260/280 yake = kuhusu 2.0.RNA safi ndio 'sababu' na A260/A280 = 2 ndio 'athari'.Sasa kila mtu anatumia A260/A280 kama 'sababu', akifikiri kwamba "ikiwa A260/A280 = 2, basi RNA ni safi", ambayo kwa kawaida husababisha kuchanganyikiwa.
Ikiwa una nia, unaweza kuongeza kitendanishi kidogo ambacho hutumiwa mara nyingi katika uchimbaji, kama vile phenol, guanidine isothiocyanate, PEG, n.k., kwenye sampuli yako ya RNA, kisha kupima uwiano wa A260/A280.Ukweli ni kwamba vitendanishi vingi vinavyotumika kwa uchimbaji wa RNA, pamoja na uchafu mwingi kwenye sampuli, hunyonya karibu A260 na A280, na kuathiri A260/A280.
Njia inayofundisha zaidi kwa sasa ni kuchanganua sampuli za RNA katika safu ya 200-300 nm.Curve ya RNA safi ina sifa zifuatazo: curve ni laini, A230 na A260 ni pointi mbili za inflection, A300 ni karibu na 0, A260/A280 = karibu 2.0, na A260/A230 = karibu 2.0.Ikiwa data ya skanisho haipatikani, uwiano wa A260/A230 lazima pia ubainishwe, kwa kuwa uwiano huu ni nyeti zaidi kwa kubeba uchafu wote unaoathiri mmenyuko wa enzymatic.Zingatia safu ya mstari wa kifaa (0.1–0.5 kwa A260).
Kuna matukio mengine mawili muhimu: uwiano utakuwa karibu 0.3 chini wakati A260/A280 inapimwa katika maji;ilhali uwiano unaopimwa katika 10 mm EDTA ni takriban 0.2 juu kuliko ule uliopimwa katika 1 mm EDTA.
Bidhaa zinazohusiana:
Mfululizo wa kutengwa wa RNA - Foregene Co., Ltd. (foreivd.com)
Muda wa kutuma: Jul-15-2022
