Kingamwili, pia huitwa immunoglobulins (Ig), ni glycoproteini ambazo hufunga kwa antijeni haswa.
 
Maandalizi ya kawaida ya kingamwili hutolewa kwa kuwachanja wanyama na kukusanya antiserum.Kwa hiyo, antiserum kawaida huwa na kingamwili dhidi ya antijeni nyingine zisizohusiana na vipengele vingine vya protini katika seramu.Molekuli za antijeni za jumla huwa na epitopu nyingi tofauti, kwa hivyo kingamwili za kawaida pia ni mchanganyiko wa kingamwili dhidi ya epitopu nyingi tofauti.Hata kingamwili za seramu za kawaida zinazoelekezwa dhidi ya epitopu hiyo hiyo bado zinajumuisha kingamwili tofauti tofauti zinazozalishwa na kloni tofauti za seli B.Kwa hiyo, kingamwili za kawaida za seramu pia huitwa kingamwili za polyclonal, au kingamwili za polyclonal kwa kifupi.
 
Kingamwili ya monokloni (kingamwili ya monokloni) ni kingamwili inayofanana sana inayotolewa na kloni ya seli moja ya B na inayoelekezwa tu dhidi ya epitopu maalum.Kwa kawaida hutayarishwa kwa teknolojia ya hybridoma—teknolojia ya kingamwili ya hybridoma inategemea teknolojia ya muunganisho wa seli, ikichanganya seli B zenye uwezo wa kutoa kingamwili mahususi na seli za myeloma zilizo na uwezo usio na kikomo wa ukuaji katika mchanganyiko wa seli B.Seli hii ya hybridoma ina sifa za seli kuu.Inaweza kuenea kwa muda usiojulikana na bila kufa katika vitro kama seli za myeloma, na inaweza kuunganisha na kutoa kingamwili maalum kama vile lymphocyte za wengu.Kwa njia ya cloning, mstari wa monoclonal unaotokana na kiini kimoja cha hybridoma, yaani, mstari wa seli ya hybridoma, unaweza kupatikana.Kingamwili inazozalisha ni kingamwili zenye uwiano mkubwa dhidi ya kibainishi sawa cha antijeni, yaani, kingamwili za monokloni.
 
Kingamwili zipo kama monoma moja au zaidi zenye umbo la Y (yaani, kingamwili za monokloni au kingamwili za polyclonal).Kila monoma yenye umbo la Y ina minyororo 4 ya polipeptidi, ikijumuisha minyororo miwili mizito inayofanana na minyororo miwili ya mwanga inayofanana.Mnyororo mwepesi na mnyororo mzito huitwa kulingana na uzito wao wa Masi.Sehemu ya juu ya muundo wa Y ni eneo la kutofautiana, ambalo ni tovuti ya kumfunga antijeni.(Dondoo kutoka Dhana ya Kingamwili ya Detai Bio-Monoclonal)
 
Muundo wa kingamwili
Mlolongo mzito
Kuna aina tano za minyororo mizito ya mamalia Ig, iliyopewa jina la herufi za Kigiriki α, δ, ε, γ, na μ.Kingamwili zinazolingana huitwa IgA, IgD, IgE, IgG, na IgM.Minyororo nzito tofauti hutofautiana kwa saizi na muundo.α na γ zina takriban 450 amino asidi, wakati μ na ε zina takriban 550 amino asidi.
Kila mlolongo mzito una kanda mbili: eneo la mara kwa mara na eneo la kutofautiana.Antibodies zote za aina moja zina kanda sawa ya mara kwa mara, lakini kuna tofauti kati ya antibodies ya aina tofauti.Mikoa ya mara kwa mara ya minyororo nzito γ, α, na δ inaundwa na vikoa vitatu vya Ig kwa sanjari, na eneo la bawaba ili kuongeza unyumbufu wake;mikoa ya mara kwa mara ya minyororo nzito μ na ε inaundwa na vikoa 4 vya Ig.Eneo badiliko la mnyororo mzito wa kingamwili zinazozalishwa na seli tofauti za B ni tofauti, lakini eneo badiliko la kingamwili linalotolewa na seli B sawa au kloni ya seli ni sawa, na eneo badiliko la kila mnyororo mzito ni takriban asidi 110 za amino kwa urefu., Na kuunda kikoa kimoja cha Ig.
 
Mlolongo wa mwanga
Kuna aina mbili tu za minyororo ya mwanga katika mamalia: aina ya lambda na aina ya kappa.Kila mlolongo wa mwanga una vikoa viwili vilivyounganishwa: eneo la mara kwa mara na eneo la kutofautiana.Urefu wa mnyororo wa mwanga ni kuhusu 211 ~ 217 amino asidi.Minyororo miwili ya mwanga iliyo katika kila kingamwili huwa sawa kila wakati.Kwa mamalia, mnyororo wa mwanga katika kila kingamwili una aina moja tu: kappa au lambda.Katika baadhi ya wanyama wenye uti wa mgongo wa chini, kama vile samaki wa cartilaginous (samaki wa cartilage) na samaki wenye mifupa, aina nyingine za minyororo ya mwanga kama vile aina ya iota (iota) pia hupatikana.
 
Sehemu za Fab na Fc
Sehemu ya Fc inaweza kuunganishwa moja kwa moja na vimeng'enya au rangi za fluorescent kuweka lebo ya kingamwili.Ni sehemu ambayo antibody hupiga kwenye sahani wakati wa mchakato wa ELISA, na pia ni sehemu ambapo antibody ya pili inatambulika na imefungwa katika immunoprecipitation, immunoblotting na immunohistochemistry.Kingamwili zinaweza kubadilishwa hidrolisisi katika sehemu mbili za F(ab) na sehemu moja ya Fc kwa vimeng'enya vya proteolytic kama vile paini, au zinaweza kuvunjwa kutoka eneo la bawaba na pepsin na kuingizwa hidrolisisi katika sehemu moja ya F(ab)2 na sehemu moja ya Fc.Vipande vya kingamwili vya IgG wakati mwingine ni muhimu sana.Kwa sababu ya ukosefu wa sehemu ya Fc, sehemu ya F(ab) haitashuka pamoja na antijeni, wala haitanaswa na seli za kinga katika tafiti za vivo.Kwa sababu ya vipande vidogo vya molekuli na ukosefu wa utendakazi wa kuunganisha mtambuka (kutokana na ukosefu wa sehemu ya Fc), sehemu ya Fab kawaida hutumika kwa kuweka alama za redio katika masomo ya utendaji, na sehemu ya Fc hutumiwa hasa kama wakala wa kuzuia katika uwekaji madoa wa histokemikali.
 
Mikoa inayobadilika na isiyobadilika
Eneo la kutofautiana (eneo la V) liko kwenye 1/5 au 1/4 (iliyo na takriban mabaki 118 ya asidi ya amino) ya mnyororo wa H karibu na N-terminus na 1/2 (iliyo na takriban 108-111 mabaki ya amino asidi) karibu na N-terminus ya mnyororo wa L.Kila eneo la V lina peptidi ya peptidi iliyoundwa na vifungo vya disulfidi ya ndani, na kila pete ya peptidi ina takriban mabaki 67 hadi 75 ya asidi ya amino.Muundo na mpangilio wa amino asidi katika eneo la V huamua umaalum wa kumfunga antijeni wa kingamwili.Kwa sababu ya aina zinazobadilika kila mara na mlolongo wa asidi ya amino katika eneo la V, aina nyingi za kingamwili zilizo na sifa tofauti za kizuia antijeni zinaweza kuundwa.Mikoa ya V ya mnyororo wa L na mnyororo wa H huitwa VL na VH, mtawaliwa.Katika VL na VH, utungaji wa asidi ya amino na mfuatano wa baadhi ya maeneo ya ndani una kiwango cha juu cha tofauti.Mikoa hii inaitwa hypervariable regions (HVR).Muundo wa asidi ya amino na mpangilio wa sehemu zisizo za HVR katika eneo la V ni kihafidhina, ambayo inaitwa kanda ya mfumo.Kuna sehemu tatu zinazoweza kubadilika katika VL, kwa kawaida ziko kwenye mabaki ya asidi ya amino 24 hadi 34 na 89 hadi 97 mtawalia.HVR tatu za VL na VH zinaitwa HVR1, HVR2 na HVR3, mtawalia.Utafiti na uchanganuzi wa utengano wa fuwele ya X-ray ulithibitisha kuwa eneo linaloweza kubadilika-badilika kwa hakika ni mahali ambapo antijeni ya kingamwili hujifunga, kwa hivyo inaitwa eneo la kuamua ukamilishano (CDR).HVR1, HVR2 na HVR3 ya VL na VH inaweza kuitwa CDR1, CDR2 na CDR3 mtawalia.Kwa ujumla, CDR3 ina kiwango cha juu cha hypervariability.Eneo linaloweza kubadilika-badilika pia ndilo eneo kuu ambapo viambishi vya idiotypic vya molekuli za Ig zipo.Katika hali nyingi, mnyororo wa H una jukumu muhimu zaidi katika kumfunga antijeni.
Eneo la kudumu (eneo C)iko kwenye 3/4 au 4/5 (takriban kutoka amino asidi 119 hadi C terminal) ya mnyororo wa H karibu na kituo cha C na 1/2 (ina takriban mabaki 105 ya asidi ya amino) karibu na kituo cha C cha mnyororo wa L.Kila eneo linalofanya kazi la mnyororo wa H lina takriban mabaki 110 ya asidi ya amino, na lina pete ya peptidi inayojumuisha mabaki 50-60 ya asidi ya amino iliyounganishwa na vifungo vya disulfidi.Muundo wa asidi ya amino na mpangilio wa eneo hili ni sawa katika mnyororo wa isotype L ya mnyama Ig na aina sawa ya H.Vile vile, inaweza tu kuunganisha kwa antijeni inayofanana, lakini muundo wa eneo lake la C ni sawa, yaani, ina antigenicity sawa.Kingamwili ya pili ya kupambana na binadamu ya IgG (au anti-antibody) inaweza kuunganishwa na mchanganyiko mbili A wa kingamwili (IgG) dhidi ya exotoksini tofauti hutokea.Huu ni msingi muhimu wa kuandaa kingamwili za sekondari na kutumia fluorescein, isotopu, vimeng'enya na kingamwili zingine zilizo na lebo.
 
 
Bidhaa Zinazohusiana:
Seli ya moja kwa moja ya RT-qPCR