Vidokezo vya Kuboresha Urejeshaji wa Gundi

1. Kuongeza mzigo wa sampuli wakati wa electrophoresis.

2. Tumia bafa ya electrophoresis iliyoandaliwa upya.

3. Wakati wa kukata gundi, jaribu kukata gundi tu na vipande ili kupunguza kiasi cha kukata gundi: usihitaji gundi na vipande vichache vya kusudi, vinginevyo itaathiri kiwango cha kurejesha.

4. Baada ya kuyeyuka vipande viwili au zaidi vya gundi, tumia bomba bila kujali ni kiasi gani kikubwa na uhamishe kwenye safu sawa.

5. Suluhisho lililoongezwa katika sol linaweza kuwa kidogo zaidi, ambalo linafaa zaidi kwa kumfunga DNA kwenye membrane, lakini kwa ujumla usizidi 750ul.

6. Muhimu wa kurejesha gel ni kumfunga DNA kwenye safu kupitia mkusanyiko wa chumvi, asidi (malipo) na hydrophobicity ya suluhisho kwenye safu.Kwa hiyo, ikiwa pH ya buffer ya electrophoresis ni ya juu sana, 10ul (pH 5.0, 3mol / L NaAC) inaweza kuongezwa kwenye sol;ili kuzuia vyema molekuli za DNA kwenye membrane, 30% isopropanol inaweza kuongezwa kwa joto ndani ya kioevu baada ya kufuta gundi.

7. Kabla ya kuongeza kielelezo, acha safu kwenye joto la kawaida kwa dakika chache (kama dakika 10) ili kuyeyusha kikamilifu ethanoli.

8. Hatimaye, ongeza maelezo machache ili kupunguza kiasi cha urejeshaji.Kwa ujumla, 30-50μl eluent hutumiwa kwa elution (sio kidogo sana, vinginevyo haitaweza kulowesha membrane, ambayo haifai kwa elution);matone ya elution yako katikati ya utando, ili kufuta kikamilifu DNA iliyofungwa kwenye membrane.

9. Baada ya kuongeza eluent, inaweza eluted katika umwagaji wa maji ya digrii 55 kwa dakika 5 au kuwekwa katika umwagaji maji ya digrii 50 kwa zaidi ya dakika 10, au muhuri na parafilm kwa digrii 4 mara moja, na kisha centrifuged kwa ajili ya kupona siku ya pili, athari ni nzuri.

10.Ongeza centrifuged eluate nyuma kwa safu adsorption na centrifuge tena.

Mbinu na taratibu za kina za kurejesha bidhaa za PCR

1. Usafishaji wa kawaida wa mpira

Ikiwa unataka kurejesha gundi, ni bora kutumia kit, ambayo ni rahisi na ina kiwango cha juu kidogo cha kurejesha.Ikiwa unahitaji kweli kurejesha kwa manually, unaweza kuongeza mara 3 kiasi cha TE baada ya kukata gundi.Baada ya kuyeyuka katika umwagaji wa maji, phenol, phenol / kloroform hutolewa kwa usafi, na ethanol hupungua.Ni hayo tu.

2. Urejeshaji wa DNA kutoka kwa gel za kiwango cha chini cha kuyeyuka

Utakaso wa Vipande vya DNA Ongeza TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0, 0.1 mmol/l EDTA) sawa na kiasi cha gel, na uweke kwenye umwagaji wa maji wa 65 ° C kwa dakika 5 ili kufuta gel kabisa.

Baada ya kuletwa kwa joto la kawaida, kiasi sawa cha phenol (iliyojaa na TE, TE ilifungwa kwenye safu ya juu, na safu ya chini ya phenol iliondolewa) iliongezwa, na mchanganyiko ulichanganywa kwa upole (hakuna kuchanganya inahitajika), na centrifuged saa 12,000 rpm kwa dakika 3.Kurudia mara 1-2.

Chukua dawa ya juu zaidi, ongeza ujazo 0.1 wa 3mol/L acetate ya sodiamu (pH 5.2) na mara 2.5 ujazo wa ethanoli kabisa ili kutekeleza kunyesha kwa ethanoli.Futa DNA iliyosafishwa kwa kiwango kinachofaa cha TE, pima yaliyomo, na ujitayarishe kwa matumizi (inaweza kutumika kwa uchanganuzi wa muundo wa jeni lengwa, utayarishaji wa uchunguzi, n.k.).

3. Urejeshaji wa PCR na umaalum mzuri wa ukuzaji

Ikiwa maalum ya ukuzaji wa PCR ni nzuri, ni utakaso rahisi na urejeshaji wa bidhaa ya PCR.Unaweza kuongeza 50ug/ml proteinase K kwenye bidhaa ya PCR, digrii 37 kwa saa 1, toa mara moja na phenoli/kloroform, toa mara moja na klorofomu, na kuongeza ujazo 0.1 wa nguvu kuu.Acetate ya sodiamu ilipatikana kwa kunyesha kwa kiasi cha 2.5 cha ethanoli kabisa.

Bidhaa zinazohusiana:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/