Kiasi gani unajua

Kuhusu Nuchimbaji wa asidi ya ucleic

Mwanzo na mwisho wa asidi ya nucleic iliyosafishwa

Kila kitu ni vigumu mwanzoni, asidi ya nucleic iliyosafishwa ni zaidi

Kuanzishwa kwa majaribio ya molekuli, kwa majaribio yaliyofuata

Kufanikiwa au kutofanikiwa kuna athari kubwa.

Kipima spectrophotometer cha Trace/ultra-trace kinapendelewa na watafiti wengi wa kisayansi kwa sababu kinaweza kugundua ukolezi wa asidi ya nukleiki na mabaki ya protini na ioni za chumvi kwa urahisi, haraka na kiuchumi.

Kama tunavyojua sote, A260 inamaanisha thamani ya OD ya kunyonya asidi ya nucleic, A280 ina maana thamani ya OD ya mkusanyiko wa protini, A230 ina maana ya unyonyaji wa ioni ya chumvi OD thamani, hivyo A260 inaweza kubadilisha mkusanyiko wa asidi ya nucleic, A260/280 inamaanisha mabaki ya protini, A260/230 inamaanisha mabaki ya ioni ya chumvi, lakini hii ni kanuni ya msingi ya utafiti.kawaida” kuamini kwamba inaweza kueleza usafi wa DNA na RNA kwakiasi fulani.Sio kiwango pekee cha utambuzi wa mavuno na usafi wa asidi ya nucleic, inatumika tu kama kumbukumbu, na sio "kiwango cha dhahabu".

Mwongozo wa Thermo Fisher ND-2000 unasisitiza uaminifu wa matokeo ya mtihani

Sababu ni kwamba matokeo yaliyopatikana kwa kutumia micro/ultramicro UV spectrophotometer yanaonyesha tu mavuno na usafi wa asidi nucleic kutoka upande, na kuna mambo mengi ya ushawishi (njia ya macho, kiasi cha sampuli, mkusanyiko wa sampuli, thamani ya pH, ioni nyingine zinazoathiri kipimo cha kunyonya, nk.) , thamani ya OD iliyopimwa si lazima iwe sahihi.Wakati huo huo, kwa sababu ya kukosekana kwa umaalumu wa nyenzo za kuamua thamani ya unyonyaji, DNA ya kamba moja, DNA yenye nyuzi mbili, RNA, dNTPs, na baadhi ya protini zina kilele cha kunyonya kwa urefu wa 260nm, na mkusanyiko unaoamuliwa na A260 pekee sio lazima DNA halisi au RNA.Kuzingatia, na uadilifu wake na uharibifu hauwezi kuhukumiwa.

Kwa hivyo jinsi ya kuhukumu ubora wa asidi yetu ya nucleic iliyosafishwa?Mbali na kutumia spectrophotometer ya micro/ultramicro ya UV ili kugundua, mbinu kama vile electrophoresis ya jeli ya agarose zinahitajika pia ili kuonyesha usafi na uadilifu wa asidi nucleic, na kuonyesha ukolezi kwa kiwango fulani.Kwa njia hii, mavuno ya asidi ya nucleic na usafi unaopatikana kutokana na matokeo ya kugundua ya mbinu mbalimbali ni ya kuaminika.

Ulinganisho wa chati ya majaribio

DNA Genomic ya seli H1299 ilitolewa kwa kutumia vifaa vya uchimbaji wa DNA vya kampuni A, na uchafuzi mkubwa wa uchafu ulionekana, na kusababisha viwango vya juu vya OD.

(Thamani ya kipimo cha OD na electropherogram inayolingana)

Kielezo cha tathmini

Je, kuna "kiwango cha dhahabu" cha mavuno ya asidi ya nukleiki na upimaji wa ubora?

Kwa kadiri tunavyojua, hakuna njia rahisi, ya haraka na ya bei nafuu.Ikiwa ni spectrophotometer, electrophoresis ya gel, au spectrometry ya molekuli, zote zinaonyesha mkusanyiko na usafi wa asidi ya nucleic katika suluhisho kutoka kwa vipengele tofauti, na wanahitaji kuhukumiwa kwa kurejelea kila mmoja.

Fahirisi bora zaidi ya tathmini ni kila wakatimaombi ya ufuatiliaji wa majaribio.Haiathiri ufanisi wa unukuzi wa kinyume na ukuzaji wa PCR.Kupata bidhaa zinazotegemeka za ukuzaji na maadili ya Ct, na kupata mlolongo kamili kwa kupanga ni mafanikio ya uchimbaji wa asidi ya nucleic.

Kwa muhtasari, mtazamo wa nadharia ya uwiano pekee unapaswa kupingwa na mtazamo wa "kutumia matokeo mazuri ya majaribio ya chini kama vigezo vyema vya uchimbaji"!

Seti za uchimbaji za Foregene DNA RNA zinazopendekezwa ili kupata usafi wa juu wa DNA/RNA:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/