RNase ni neno nyeti ambalo wanafunzi wengi ambao mara nyingi hufanya majaribio ya uchimbaji wa RNA hawataki kusikia.Ukiwa na silaha kamili, RNA ambayo hatimaye ilitolewa pamoja na vitendanishi vyenye sumu kali ya phenoli na klorofomu iliharibiwa.sijapatanishwa!!!Leo, hebu tuangalie asili ya Rnase maarufu.

Ribonuclease (RNase), au RNase, ni nuclease ambayo inaweza hidrolisisi RNA katika molekuli ndogo.RNase, kama protini ndogo ya molekuli, ni thabiti isivyo kawaida .Joto la juu la kawaida na sterilization ya mvuke ya shinikizo la juu na vizuizi vya protini haziwezi kuzima kabisa.Utulivu wa RNase hasa hutoka kwa vifungo vya disulfide katika muundo.Kwa mfano, RNase ya kawaida ya kongosho ya bovin ina amino asidi 124 tu, lakini ina vifungo 4 vya disulfide.Bondi ya salfa na dhamana ya disulfidi huipa RNase uthabiti bora wa joto.Kwa kuongezea, rnase ina uzani mdogo wa Masi na inaweza kurejesha haraka muundo wake wa asili katika hali nyingi.

Mbali na kuwa dhabiti sana,RNases ziko kila mahali kwenye maabara .RNase ni utaratibu wa ulinzi wa kibiolojia.Kwa seli, RNA ya nje mara nyingi ni mbaya.Ikilinganishwa na DNA ya nje, RNA ya nje mara nyingi ni hatari zaidi.RNA imenakiliwa na kutafsiriwa kwa furaha, kwa hivyo karibu viumbe vyote vimetengeneza RNases ili kulinda dhidi ya uvamizi wa RNA ya nje.Kwa hivyo, seli za bakteria zilizopandwa kwenye maabara na wewe unayetoa RNA hutoa harufu ya RNase.Maji maji ya mwili wa binadamu (mate, machozi, nk) yana kiasi kikubwa cha RNase, hivyo usilie wakati RNA inaharibiwa.Unapolia zaidi, ndivyo uharibifu wa RNA unavyozidi kuwa mbaya zaidi!!Dada Daiyu haifai kwa uchimbaji wa RNA!

Kwa kuongeza, ngozi yako maridadi pia ina RNase nyingi, na alama, pipettes, milango ya jokofu, na vipini vya mlango ambavyo vimeguswa na ngozi pia vina RNase.

Kwa mbio nyingi, hebu tuangalie jinsi ya kukabiliana na RNases.

Jambo la kwanza ambalo kila mtu anafikiria wakati wa kuondoa RNA niDEPC(diethyl pyrocarbonate).DEPC hasa hubadilisha protini kwa kuunganishwa na pete ya imidazole ya histidine ya RNase ya kikundi hai, na hivyo kuzuia shughuli ya kimeng'enya.0.1% DEPC inaweza kuwa na athari bora ya uondoaji kwenye Rnase, lakini tunahitaji kuzingatia kwamba DEPC ni kansajeni inayojulikana, kwa hivyo tahadhari maalum inapaswa kulipwa wakati wa kuitumia.

Kwa RNase, tunahitaji kuanza kutoka kwa nyanja mbili,kwanza ni kuzuia shughuli ya RNase endogenous

Vitendanishi vya kawaida vya uchimbaji wa RNA kama vile guanidine isothiocyanate na DTT vilivyo katika Trizol vinaweza kufungua dhamana ya disulfide ya RNase, lakini bado kuna baadhi ya RNase, hasa katika sampuli za tishu, kwa hivyo makini na halijoto ya chini.

1.Mara moja tumbukiza sampuli ya tishu katika nitrojeni kioevu baada ya kuitoa, au katika suluhisho la kibiashara la kuhifadhi RNA.

2.Baada ya kutoa RNA ya sampuli ya seli, ongeza kwenye suluhisho la lysis na uiweka kwenye sanduku la barafu

3. Ni bora kutumia nitrojeni kioevu kwa kusaga wakati sampuli za tishu zinafanywa homogenized.Unapotumia homogenizer ya umeme bila nitrojeni ya kioevu, makini na kikamilifu kabla ya baridi ya adapta ya homogenate.

Ya pili ni DNase ya nje

1.Kuwa na silaha kamili, vaa koti la maabara, vaa kinyago, na hakikisha umevaa jozi ya glavu mpya (usiwe na akiba sana!! Ikumbukwe kwamba Trizol ni babuzi sana, na pia ina nguvu sana kupitia glavu, kwa hivyo usidondoshe kwenye mikono yako).

2.Vidokezo vyote vilivyotumika vya pipette, mirija ya EP, mirija ya PCR na vifaa vingine lazima vitibiwe.Inaweza kulowekwa katika 0.1% DEPC na kisha kushinikizwa chini ya shinikizo la juu.Makini na operesheni katika kofia ya moshi.Watawala wa kienyeji wanaweza kununua moja kwa moja vitu vya matumizi kwa ajili ya kuondoa vimeng'enya.

PS: Acha nikuambie mbinu ya uvivu.Ingawa joto la juu na shinikizo la juu haziwezi kuondoa kabisa RNase, itaondoa sehemu kubwa yake.Mara 2 ya joto la juu na shinikizo la juu lina athari nzuri, na uchimbaji wa RNA una athari kidogo.

3.Pombe inaweza kubadilisha protini,hivyo jedwali la uchimbaji wa RNA linaweza kufutwa na pombe 75%. , na kinga pia inaweza kunyunyiziwa na pombe.

4.Suluhisho la mwisho la kuyeyusha la RNA na bomba la centrifuge pia linapaswa kutibiwa kwa de-RNase.Maji ya DEPC ni suluhisho la kawaida la kutengenezea la RNA.Wacha tuzungumze juu ya njia sahihi ya utayarishaji wa maji ya DEPC (kumbuka kuweka tena DEPC ya kibiashara unapoinunua)

Ongeza DEPC kwa maji ya ultrapure saa 1:1000, tikisa vizuri, acha kusimama usiku kucha kwa 37 ° C, na sterilize kwa 121 ° C chini ya joto la juu na shinikizo la juu kwa dakika 15.Maji ya DEPC yanaweza kuhifadhiwa kwa -20 ° C katika aliquots 1ml.

Hatimaye, kwa muhtasari: joto la chini ni ufunguo, vifaa vya matumizi vinashughulikiwa vizuri, silaha kamili na mazungumzo kidogo!

Naam, hiyo ni kwa mkakati wa leo.Nawatakia umakini na usafi wa RNA wote mlioutaja.A260/A280 zote ni 2.0!!!

Bila shaka, ikiwa unatumia aoperesheni ya joto la chumba kit ya uchimbaji wa RNA, huenda usipate shida zilizo hapo juu.

Uendeshaji kwenye joto la kawaida, bila kuongeza DNase, hutoa jumla ya RNA kutoka kwa seli katika dakika 11, na hutoa jumla ya RNA kutoka kwa tishu za wanyama au mimea katika dakika 30.

Kwa sampuli za majaribio, tafadhali wasiliana na:overseas@foregene.com

Bidhaa Zinazohusiana:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/