Ninaamini kuwa kila mtu atakutana na shida kama hizo au kama hizo wakati wa kufanya athari za PCR, lakini nyingi zinaweza kuainishwa katika shida kuu mbili:

Ukuzaji mdogo sana wa template ya jeni (amplification);
Ukuzaji wa jeni usiolengwa sana.
Kutumia viungio ni mojawapo ya mikakati ya kawaida ya kutatua matatizo haya.Kawaida jukumu la nyongeza lina mambo mawili:
muundo wa sekondariya jeni (muundo wa sekondari);
Punguza priming zisizo maalum.
Leo, mhariri atakujulisha kwa ufupi viungio vya kawaida katika athari za PCR na kazi zake.
Viungio vinavyopunguza muundo wa sekondari
sulfoxide(DMSO)
sampuli za jeniyenye maudhui ya juu ya GC.Hata hivyo, DMSO pia inapunguza sana shughuli ya Taq polymerase.Kwa hiyo, kila mtu anapaswa kusawazisha upatikanaji wa template na shughuli za polymerase.Mhariri anapendekeza kwamba unaweza kujaribu viwango tofauti vya DSMO, kama vile kutoka 2% hadi 10%, ili kupata mkusanyiko unaolingana na jaribio lako.
Sabuni zisizo za ionic
Sabuni zisizo za ioni, kama vile 0.1-1% Triton X-100, Tween 20 au NP-40, kwa kawaida hupunguza muundo wa pili wa DNA.Ingawa hii inaweza kuongeza ukuzaji wa jeni la kiolezo, pia itasababisha shida ya ukuzaji usio maalum.Kwa hivyo, viungio hivi hufanya kazi vizuri kwa athari za PCR za mavuno kidogo bila uchafu, lakini sio vizuri kwa athari chafu za PRC.Faida nyingine ya sabuni zisizo za ioni ni kupunguzwa kwa uchafuzi wa SDS.Kawaida wakati wa mchakato wa uchimbaji wa DNA, SDS italetwa kwa hatua ya PCR, ambayo inazuia sana shughuli za polymerase.Kwa hivyo, kuongeza 0.5% Tween-20 au Tween-40 kwa majibu kunaweza kupunguza athari mbaya za SDS.
Betaine_
Betaine inaweza kuboresha ukuzaji wa DNA kwa kupunguza uundaji wa muundo wa pili na kwa ujumla ni nyongeza ya "siri" kwa vifaa vya PCR vya kibiashara.Ikiwa unataka kutumia betaine, unapaswa kuweka betaine au betaine mono-hydrate (Betaine au Betaine mono-hydrate), lakini si betaine hidrokloridi (Betaine HCl), urekebishe hadi mkusanyiko wa mwisho wa 1-1.7M.Betaine pia inaweza kusaidia kuboresha umaalumu kwa sababu huondoa utegemezi wa muundo wa jozi msingi wa kuyeyuka kwa DNA/mbadiliko wa DNA.
Viungio vya kupunguza priming zisizo maalum
Formamide
Formamide ni kiongeza kikaboni cha PCR kinachotumika sana.Inaweza kuchanganya na kijito kikubwa na kijito kidogo katika DNA, na hivyo kupunguza uthabiti wa DNA bwana helix mbili na kupunguza joto la kuyeyuka la DNA.Mkusanyiko wa formamide inayotumiwa katika majaribio ya PCR kawaida ni 1% -5%.
Tetramethylkloridi ya amonia( TMAC)
Kloridi ya tetramethylammonium inaweza kuongeza umaalum wa mseto (umaalum wa mseto) na kuongeza kiwango cha kuyeyuka kwa DNA.Kwa hivyo, TMAC inaweza kuondoa uanzishaji usio maalum na kupunguza ufunganishaji usio sahihi wa DNA na RNA.Ikiwa unatumiaprimers degeneratekatika mmenyuko wa PCR , kumbuka kuongeza TMAC, ambayo hutumiwa kwa kawaida katika mkusanyiko wa 15-100mM.
Viungio vingine vya kawaida
Mbali na kategoria mbili za nyongeza zilizotajwa hapo juu, kuna viungio vingi vya kawaida katika athari za PCR, ingawa zina kazi tofauti, pia ni muhimu sana.
Ioni ya magnesiamu
Ioni ya magnesiamu ni cofactor (cofactor) ya lazima ya polymerase, ambayo ni kusema, bila ioni ya magnesiamu, polymerase haifanyi kazi.Hata hivyo, ioni nyingi za magnesiamu zinaweza pia kuathiri ufanisi wa polymerase.Mkusanyiko wa ioni za magnesiamu katika kila mmenyuko wa PCR utatofautiana.Chelating (kama vile EDTA au citrate), mkusanyiko wa dNTP na protini huathiri mkusanyiko wa ioni za magnesiamu.Kwa hivyo, ikiwa una matatizo na jaribio lako la PCR, unaweza kujaribu kubadilisha viwango tofauti vya ioni za magnesiamu, kwa mfano, kutoka 1.0 hadi 4.0mM, na muda wa 0.5-1mM katikati.
Inafaa kumbuka kuwa mizunguko mingi ya kufungia inaweza kusababisha utaftaji wa mkusanyiko wa suluhisho la kloridi ya magnesiamu.Kwa hiyo, lazima uifuta kabisa kabla ya kila matumizi, na kuchanganya vizuri kabla ya kuitumia.
Albamin ya seramu ya ng'ombe(Bovine albumin, BSA)
Katika majaribio ya kemia ya molekuli, albin ya seramu ya ng'ombe ni nyongeza ya kawaida sana, haswa katika usagaji wa kimeng'enya na majaribio ya PCR.Katika athari za PCR, BSA inasaidia katika kupunguza uchafu kama vile misombo ya phenolic.Na pia inasemekana kwamba inaweza kupunguza kujitoa kwa reactants kwenye ukuta wa tube ya mtihani.Katika mmenyuko wa PCR, kawaida mkusanyiko wa BSA unaoongezwa unaweza kufikia 0.8 mg/ml.
 
Bidhaa Zinazohusiana:
Shujaa wa PCR(na rangi)
Shujaa wa PCR