Kuthibitisha utendakazi wa vianzio na uchunguzi katika hatua ya awali ya vitendanishi vya PCR na kubainisha hali zinazofaa zaidi za majibu ni sharti la kuhakikisha maendeleo mazuri ya majaribio rasmi.
Kwa hivyo tunahitajije kudhibitisha uchunguzi wa utangulizi katika hatua ya mwanzo?
Viashiria kuu ni msingi, curve ya ukuzaji, thamani ya ct, ufanisi wa ukuzaji, utambuzi wa sampuli ya mkazo wa chini, CV, nk.
Msingi
Msingi ni mstari wa mlalo katika curve ya ukuzaji wa PCR.Katika mizunguko michache ya kwanza ya mmenyuko wa amplification ya PCR, ishara ya fluorescence haibadilika sana na huunda mstari wa moja kwa moja.Mstari huu ulionyooka ndio msingi.
Wakati wa kuchunguza uchunguzi wa msingi wa PCR, makini ikiwa msingi ni kiwango.Usafi wa mkusanyiko wa kichunguzi cha kwanza utaathiri msingi, kama vile kusababisha msingi kupanda au kushuka.Msingi pia ni kiashiria angavu sana.
Mkondo wa Amplification
Kiashiria kingine cha angavu ni sura ya curve ya ukuzaji.Ni vyema kuwa na mkunjo wenye umbo la S ili kuepuka ukuzaji wa pili au mikunjo mingine isiyo ya kawaida ya ukuzaji.
thamani ya CT
Idadi ya mizunguko inayolingana na nukta ya inflection kutoka msingi hadi ukuaji wa kipeo ni thamani ya Ct.
Kwa sampuli sawa, uchunguzi tofauti wa primer husababisha mikondo tofauti ya ukuzaji, na thamani inayolingana ya Ct itaathiriwa na ufanisi wa ukuzaji na kiwango cha kuingiliwa.Kwa nadharia, thamani ndogo ya Ct ya probe ya primer tunayochagua, bora zaidi.
Ufanisi wa Kukuza
Mojawapo ya njia za kuaminika na thabiti za kutathmini ufanisi wa ukuzaji wa PCR ni mkunjo wa kawaida, ambao pia unatambuliwa sana na watafiti.Mbinu hii inajumuisha kutengeneza mfululizo wa sampuli ili kudhibiti idadi ya jamaa ya violezo lengwa.Sampuli hizi kawaida hufanywa na dilution za serial za suluhisho za hisa zilizokolea, inayotumika zaidi ni dilution mara 10.Kwa kutumia mfululizo wa sampuli zilizopunguzwa, kwa kutumia programu ya kawaida ya qPCR ili kukuza ili kupata thamani ya Cq, na hatimaye kuchora mduara wa kawaida kulingana na mkusanyiko wa kila sampuli na thamani ya Cq inayolingana ili kupata mlingano wa mstari Cq= -klgX0+b, na ufanisi wa ukuzaji E=10(-1 /k) -1.Unapotumia qPCR kwa uchanganuzi wa kiasi, ufanisi wa ukuzaji unahitajika kuwa kati ya 90% -110% (3.6>k>3.1).
Utambuzi wa Sampuli zenye mkazo wa chini
Wakati mkusanyiko wa sampuli ni mdogo, viwango vya ugunduzi wa vichunguzi tofauti vya utangulizi ni tofauti.Tunachagua sampuli 20 za mkazo wa chini ili kurudia, na mfumo wa uchunguzi wa awali wenye kiwango cha juu zaidi cha ugunduzi ndio bora zaidi.
Mgawo wa Tofauti (CV)
Sampuli 10 rudufu zinaweza kutambuliwa kwa vichunguzi tofauti vya utangulizi kulingana na kiwango cha laini cha kitendanishi cha utambuzi wa ukuzaji wa asidi ya nuklei.
Vitendanishi vya Kiasi:
Usahihi
Usahihi ndani ya kundi moja unapaswa kukidhi: mgawo wa tofauti (CV,%) ya thamani ya logarithmic ya mkusanyiko wa mtihani ni ≤5%.Wakati mkusanyiko wa sampuli ni mdogo, mgawo wa tofauti (CV,%) ya logariti ya mkusanyiko wa utambuzi ni ≤10%
Vitendanishi vya ubora:
Usahihi
Usahihi ndani ya kundi moja unapaswa kukidhi:
(1) Mgawo wa mabadiliko ya thamani ya Ct (CV,%) ≤5%
Sampuli hiyo hiyo inajaribiwa kwa sambamba kwa mara 10, na matokeo ya mtihani yanapaswa kuwa sawa
Muda wa kutuma: Sep-18-2021
