Waandishi: Wang Xiaoyan, Zhao Eryu

Kitengo: Hospitali ya Jiaozhou, Hospitali ya Dongfang inayohusishwa na Chuo Kikuu cha Tongji

Kwa sasa, aina kuu ya sampuli ya kugundua asidi ya nucleic ya pathojeni ya kupumua ni usufi wa koo.Kuna aina nyingi za suluhu za kuhifadhi sampuli zinazotumika kawaida, zote zinahitaji kuwekwa kwenye jokofu au kugandishwa kwa usafirishaji na uhifadhi;Ni vigumu kudhibiti mchakato mzima wa joto la chini wakati wa mchakato wa kukusanya na usafirishaji, na ni vigumu kuhakikisha udhibiti wa ubora kabla ya kupima sampuli.^[1-2].

RNase (RNase) ni endonuclease ambayo hubadilisha RNA hidrolisisi, hasa ikikata vifungo vya phosphodiester kati ya nyukleotidi.Molekuli ya RNase ni imara sana, kuna vifungo vya disulfide katika muundo, na shughuli zake hazihitaji kuwepo kwa cations divalent, hivyo RNase haipatikani kwa urahisi, na ni rahisi kubadili upya hata baada ya joto la juu au matumizi ya denaturants.RNases imegawanywa katika endogenous na exogenous.RNase asilia zinaweza kutolewa wakati huo huo seli zinapopasuka.Kwa hivyo, kuondoa jukumu la RNases endogenous ni hatua muhimu sana katika mchakato wa uchimbaji wa RNA.RNases za kigeni zinasambazwa sana.RNases zipo katika hewa, ngozi ya binadamu, nywele na mate, ambayo ni sababu muhimu za uharibifu rahisi wa RNA.^[3].

Swali la data

CANS-CL02-A009 "Utumiaji wa Mwongozo wa Ubora na Ustadi wa Maabara ya Matibabu katika Uga wa Utambuzi wa Molekuli" katika mahitaji ya kiufundi inapendekeza kwamba viwango vinavyofaa vya ubora wa maji vinapaswa kutengenezwa kulingana na maombi;Vyombo visivyopitisha hewa vinavyoweza kutupwa:

RNase/Uainishaji

(1) Nasi A

Ribonuclease A (RNase A), inayotokana na kongosho ya bovin, ni endoribonuclease ambayo inaweza kushambulia haswa mwisho wa 3′ wa mabaki ya pyrimidine kwenye RNA, kukata cytosine au uracil iliyoundwa na nyukleotidi zilizo karibu.Dhamana ya phosphodiester, bidhaa ya mwisho ya mmenyuko ni 3 "pyrimidine nucleotide na oligonucleotide yenye nucleotide ya 3" ya pyrimidine mwishoni.

(2) RNase T1

Ribonuclease T1 (RNase T1) inatokana na Aspergillus orjzae, inatumika haswa kwenye fosfati ya 3′-terminal ya guanini, na eneo la mpasuko ni kati ya 3′ fosfati ya guanini na 5′ hidroksili ya nyukleotidi zilizo karibu.Bidhaa ya mwisho ya majibu ni 3′guanylic acid na oligonucleotide vipande na 3′guanylic acid mwishoni.

(3) RNase H

Ribonuclease H (RNase H) iligunduliwa kwa mara ya kwanza kutoka kwa tishu ya ndama ya thymus, na jeni lake la usimbaji limeundwa katika Escherichia coli.Inaweza kudhoofisha DNA haswa: nyuzi za RNA katika duplexes ya mseto ya RNA, na kusababisha oligonucleotides na mononucleotides yenye mwisho wa 3'-OH na 5'-monophosphate, haiwezi kuharibu DNA moja au mbili-mbili au RNA.

RNase

Kazi na matumizi

Ribonuclease inaweza kuchochea uharibifu wa asidi ya ribonucleic (RNA) na inaweza kuunganishwa kwa njia ya bandia.Mafuta ya dawa hutumiwa juu ya kutibu majeraha na maumivu ya viungo.Kulingana na ripoti, ribonuclease inaweza kubadilisha kimetaboliki ya seli za mwenyeji, kuzuia usanisi wa virusi, kuzuia kuenea kwa virusi vya mafua katika vitro, na kuzuia uundaji wa chanjo na virusi vya herpes kwenye kiinitete cha kuku.Matumizi ya kliniki ya ribonuclease ya kila siku ya sindano ya miligramu 180 kwenye misuli, yenye manufaa kwa matibabu ya ugonjwa wa encephalitis, ribonuclease inaweza kuchochea uharibifu wa asidi ya ribonucleic (RNA), na sasa inaweza kusanisishwa.Mafuta ya dawa hutumiwa juu ya kutibu majeraha na maumivu ya viungo.Kulingana na ripoti, ribonuclease inaweza kubadilisha kimetaboliki ya seli za mwenyeji, kuzuia usanisi wa virusi, kuzuia kuenea kwa virusi vya mafua katika vitro, na kuzuia uundaji wa chanjo na virusi vya herpes kwenye kiinitete cha kuku.Matumizi ya kliniki ya ribonuclease ya kila siku ya sindano ya ndani ya misuli ya 180 mg ni ya manufaa kwa matibabu ya ugonjwa wa encephalitis.

RNase

Ufafanuzi wa Kizuizi

Ufafanuzi wa kitengo cha kizuizi cha RNase: Kiasi cha kimeng'enya kinachohitajika kuzuia 50% ya shughuli ya 5ng RNase A ni kitengo kimoja.

Jinsi Vizuizi vya RNase Hufanya Kazi

Guanidine isothiocyanate:

Guanidine isothiocyanate ni mchanganyiko wa kikaboni na fomula ya molekuli C2H6N4S.Hutumika sana katika dawa za kibayolojia, vitendanishi vya kemikali, n.k. Guanidine isothiocyanate ni wakala wa kusaga protini, na mara nyingi hutumiwa kama sehemu kuu ya suluhisho la lisisi katika vitendanishi vya uchunguzi wa molekuli.Inaweza kusambaza tishu, kuharibu muundo wa seli na kutenganisha asidi nucleic kutoka kwa nucleoprotein, na ina denaturation kali kwa RNase.Ni kizuia RNase chenye ufanisi zaidi kwa sasa.

TRIzol ni kitendanishi cha riwaya cha jumla cha uchimbaji wa RNA ambacho kinaweza kutoa jumla ya RNA moja kwa moja kutoka kwa seli au tishu.Ina vitu kama vile phenoli na guanidine isothiocyanate, ambayo inaweza kuharibu seli kwa haraka na kuzuia nucleases iliyotolewa na seli.

(Walakini, guanidine isothiocyanate ni hatari kwa afya ya watafiti wa maabara.)

RNasin:

Asidi ya glycoprotein inayotolewa kwenye ini ya panya au blastoderm ya binadamu.Rnasin ni kizuizi kisicho na ushindani cha RNase, ambacho kinaweza kushikamana na RNases mbalimbali ili kuzizima.

(Maelezo zaidi: https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hjoto la juu:

Joto la juu pia ni njia ya kawaida ya denaturation ya protini.

Diethylpyrocarbonate (DEPC):

DEPC ni kizuizi chenye nguvu lakini kisicho kamili cha RNase, ambacho kinaweza kuzuia shughuli za RNase kwa kuunganishwa na pete ya imidazole ya amino asidi ya kikundi hai cha RNase ili kubadilisha protini.

Mchanganyiko wa ribonucleoside ya Vanadyl:

Mchanganyiko unaoundwa na ioni za oksidi za vanadium na nucleosides, ambazo hufunga kwa RNase kwa namna ya vitu vya mpito, ambavyo vinaweza kuzuia kabisa shughuli za RNase.

nyingine:

SDS, urea, ardhi ya diatomaceous, nk pia zina athari fulani ya kuzuia kwenye RNase.

Mapitio ya Wataalam

Li Yujie Fundi Mkuu

Mkurugenzi wa Idara ya Maabara, Hospitali ya Jiaozhou, Hospitali ya Dongfang inayohusishwa na Chuo Kikuu cha Tongji

Ili kuzuia uharibifu wa kibiolojia wa RNase ya nje, vinyago, glavu na kofia zinapaswa kuvaliwa na kubadilishwa mara kwa mara wakati wa mchakato wa uchimbaji wa RNA.Vyombo vyote vya glasi lazima viokwe katika tanuri ya kukausha kwa 200 ° C kwa zaidi ya masaa 2.Vifaa vinavyotumiwa kuoka, kama vile plastiki, vinahitaji kutibiwa na maji ya DEPC, na kisha kuosha na maji yaliyotengenezwa.Vitendanishi au vifaa vinavyotumiwa kwa uchimbaji, kuhifadhi na kutambua RNA vinapaswa kuwekwa wakfu kwa RNA, na eneo huru la operesheni la RNA linapaswa kuanzishwa.

marejeleo:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, et al.Bakteria na virusi katika nasopharynx mara moja kabla ya kuanza kwa maambukizi makali ya njia ya kupumua kwa watoto wa Asili wa Australia[J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37 (9): 1785-1794.

[2] Tawi la Kudhibiti Maambukizi ya Hospitali ya Chama cha Kichina cha Madawa ya Kuzuia.Miongozo ya ukusanyaji na ukaguzi wa vielelezo vya microbial kliniki [J].Jarida la Kichina la Maambukizi ya Hospitali, 2018(20):3192-3200.

[3] "Jaribio la Kliniki Elfu Kumi Kwa Nini Kiasi cha Jaribio la Biolojia ya Molekuli"