Utangulizi:

RNA, jina la kisayansi ribonucleic acid, ufupisho wake unatoka kwa RiboNucleic Acid, ni aina ya asidi nucleic inayoundwa kwa kuunganisha angalau kadhaa ya ribonucleotides kupitia vifungo vya phosphodiester.

Msingi wa kuchunguza RNA ni kutoa Jumla ya RNA isiyo na uchafuzi, na kanuni ya msingi ya uchimbaji wa RNA inaweza kufupishwa kama ifuatavyo:

1. Vuruga seli kwanza

2. Kisha ondoa uchafu wa macromolecular (protini, lipids, DNA, nk.)

3. Hatimaye, RNA inanyesha huku ikiondoa chumvi na vimumunyisho vya kikaboni, na kutakasa zaidi RNA.

Njia ya zamani na ya sasa ya uchimbaji

Kizazi cha kwanza cha njia ya uchimbaji wa RNA ni mbinu ya uwekaji mvua ya TRIzol (vitendanishi vinavyotumika ni pamoja na guanidine isothiocyanate, phenol, klorofomu, n.k.) iliyovumbuliwa na babu aitwaye Piotr Chomczynski na bibi Nicoletta Sacchi, kwa sababu uvumbuzi huu unaruhusu uchimbaji wa RNA Haraka na rahisi, tangu wakati huo kuanza kwa utafiti wa RNA.

Baadaye, Babu aliuza hati miliki hii kwa Invitrogen, na Invitrogen ikakuza njia hii kwa ulimwengu na ikawa njia inayotumiwa sana.

Baadaye, Invitrogen ilinunuliwa na Thermo!

Bidhaa inayowakilisha: kitendanishi cha TRIzol cha Invitrogen

Hata hivyo, mbinu ya uwekaji mvua ya TRIzol inahitaji unyevu mwingi na uchimbaji wa RNA, na vitendanishi vinavyotumiwa ni sumu na huchukua muda mrefu kufanya kazi.

Kwa hivyo, mbinu ya utakaso ya vimeng'enya ya safu wima ya kizazi cha pili ilikuja, kwa kutumia utando wa jeli ya silika kama nyenzo mahususi ya utangazaji ya asidi ya nuklei ili kuongeza urejeshaji wa RNA kwenye sampuli huku ikiondoa uchafu mwingine.

Njia ya kizazi cha pili hurahisisha operesheni kwa msingi wa utendakazi thabiti, inapunguza hatari, na inaboresha ufanisi wa uchimbaji wa RNA.

Bidhaa za mwakilishi: QIAGEN RNeasy na bidhaa nyingi za ndani

Hata hivyo, mbinu zote mbili za kizazi cha kwanza na cha pili zinahitaji matumizi ya DNase ili kuondoa uchafuzi wa DNA, ambayo huleta usumbufu fulani kwa majaribio yanayofuata ya mkondo wa chini.DNase iliyobaki itapunguza ufanisi wa unukuzi wa kinyume na kupunguza usanisi wa cDNA wa safu ya kwanza, na hivyo kuathiri usahihi wa matokeo.

Kwa hiyo, njia ya uchimbaji wa kizazi cha tatu imeboreshwa kwa misingi ya kizazi cha pili.Jaribio halihitaji kuongeza enzymes yoyote, na RNA inaweza kupatikana kwa urahisi na safu mbili tu.

Safu wima ya 1: Safu ya DNA-Kusafisha ili kufuta DNA

Safu wima ya 2: Safu wima ya RNA pekee hutangaza na kurejesha RNA

Operesheni hiyo rahisi sio tu kuokoa muda, lakini pia inawezesha uendeshaji wa majaribio ya chini ya mkondo!

Bidhaa za mwakilishi: QIAGEN RNeasy Plus naForegeneBidhaa za mfululizo wa utakaso wa RNA

(Neasy Plus)

(Foregene yaSeti ya Kutenga ya RNA ya Mimea)

Niambie kimya kimya!Seti ya RNA ya Foregene pia inatoa Kifutio cha RNase kilicho rahisi sana kutumia, ambacho kinaweza kuondoa kabisa 400μg ya RNase kwenye uso ulio imara kwa dakika 1, bila kuongeza vitu vyovyote vya sumu kwenye mwili wa binadamu!

Picha1: Chati ya ulinganishaji wa mchakato wa uendeshaji

Bidhaa za Foregene zinaweza kukamilisha uchimbaji wa RNA katika nyimbo mbili pekee, usiwafanye wengine kuwa na wivu juu ya maendeleo yako ya majaribio!

Picha2:Ematokeo ya majaribio chati ya kulinganisha

Kizazi cha kwanza (1: TRIzol)

Kizazi cha pili (2: RNeasy of QIAGEN)

Kizazi cha tatu (3: QIAGEN's RNeasy plus, 4: Foregene)

Picha3: grafu ya qPCR (grafu ya curve ya ukuzaji)

Kizazi cha kwanza (kijani kinamaanisha TRIzol -, nyekundu inamaanisha TRIzol +)

Kizazi cha pili (bluu ya anga inamaanisha QIAGEN RNeasy-, nyekundu inamaanisha QIAGEN RNeasy +)

Kizazi cha tatu (bluu inamaanisha QIAGEN RNeasy plus, kijani inamaanisha Foregene)

(Kumbuka: grafu ya qPCR “-” inaonyesha kwamba DNase haijaongezwa na uchafuzi wa DNA haujaondolewa. Kwa hiyo, CT ni ya juu zaidi na matokeo si sahihi; “+” inaonyesha kwamba DNase imeongezwa na uchafuzi wa DNA umeondolewa, matokeo yake ni sahihi)

Kila uboreshaji wa kiufundi unamaanisha kuwa utendakazi wa jaribio unakua katika mwelekeo rahisi na wa kirafiki zaidi.

Foregene inalenga kusaidia watafiti zaidi wa kisayansi kuokoa muda wa majaribio na gharama, kupata matokeo ya majaribio ya ubora wa juu, na kuunda mafanikio ya utafiti wa kisayansi yenye thamani zaidi.