Mwongozo wa Uchambuzi wa Tatizo

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

Mavuno ya chini au hakuna DNA

Kwa kawaida kuna mambo mengi yanayoathiri mavuno ya DNA ya jeni, ikiwa ni pamoja na chanzo cha sampuli, umri wa sampuli, masharti ya uhifadhi wa sampuli na uendeshaji.

DNA ya jeni haikuweza kupatikana wakati wa uchimbaji

1. Sampuli za tishu huhifadhiwa vibaya au kuhifadhiwa kwa muda mrefu sana, na kusababisha uharibifu wa DNA ya genomic.

Pendekezo: Hifadhi sampuli za tishu katika nitrojeni kioevu au -20°C;jaribu kutumia sampuli mpya zilizokusanywa kwa uchimbaji wa DNA ya genomic.

2. Kiasi kidogo sana cha sampuli kinaweza kusababisha DNA inayolingana ya jeni kutotolewa.

Pendekezo: Kwa sampuli za tishu ambazo zimehifadhiwa kwa muda mrefu au zina uharibifu mkubwa wa DNA ya jeni, kiasi cha sampuli za tishu kinaweza kuongezwa ipasavyo ili kutoa DNA kubwa ya jeni.Kiasi cha sampuli kinaweza kuamua kulingana na mahitaji ya DNA, lakini sampuli safi haipaswi kuzidi 100mg, na sampuli kavu haipaswi kuzidi 30mg.

3. Sampuli haijasagwa na nitrojeni kioevu au kuwekwa kwa muda mrefu baada ya nitrojeni kioevu.

Pendekezo: Wakati wa uchimbaji wa DNA, sampuli inahitaji kusagwa kikamilifu na nitrojeni kioevu ili kuvunja ukuta wa seli;baada ya kusaga, tafadhali hamishia sampuli ya unga hadi PL1 iliyowashwa tayari saa 65°C haraka iwezekanavyo (mara tu unga wa ardhi unayeyuka, DNA ya genomic itaanza kuharibika haraka) .

4. Uhifadhi usiofaa wa Foregene Protease husababisha shughuli iliyopunguzwa au iliyozimwa.

Pendekezo: Thibitisha masharti ya uhifadhi wa Foregene Protease au ubadilishe na Foregene Protease mpya kwa hidrolisisi ya enzymatic.

5. Seti ya vifaa huhifadhiwa vibaya au kuhifadhiwa kwa muda mrefu sana, na kusababisha baadhi ya vipengele kwenye kit kushindwa.

Pendekezo: Nunua kifaa kipya cha uchimbaji cha DNA ya mmea kwa shughuli zinazohusiana.

6. Matumizi yasiyofaa ya kit.

Pendekezo: Nunua Seti ya Kutenga ya DNA ya Mimea iliyowekwa kwa sampuli za uchimbaji na utakaso wa DNA ya mmea.

7. Buffer WB bila kuongeza aisiyo na maji ethanoli.

Pendekezo: Hakikisha umeongeza kiwango sahihi cha ethanoli kabisa kwenye Buffer WB.

8. Kielelezo hakikudondoshwa kwenye utando wa silika kwa usahihi.

Pendekezo: Ongeza kielelezo kilichopashwa moto awali saa 65℃kushuka hadi katikati ya utando wa gel ya silika, na uiache kwenye joto la kawaida kwa dakika 5 ili kuongeza ufanisi wa elution.

Uchimbaji ili kupata DNA ya mazao ya chini ya genomic

1. Sampuli imehifadhiwa vibaya au kuhifadhiwa kwa muda mrefu sana, na kusababisha uharibifu wa DNA ya genomic.

Pendekezo: Hifadhi sampuli za tishu saa -20℃;jaribu kutumia sampuli mpya za tishu zilizokusanywa kwa uchimbaji wa DNA ya jeni.

2. Ikiwa kiasi cha sampuli za tishu ni kidogo sana, DNA ya jeni iliyotolewa itakuwa ndogo.

Pendekezo: Baadhi ya sampuli za mimea zina maji mengi, kama vile mimea ya majini kama vile mwani, n.k., kipimo kinaweza kuongezwa ipasavyo au maji yanaweza kukosa maji kidogo kabla ya operesheni.

3. Sampuli hazikusagwa vizuri na nitrojeni kioevu au ziliachwa kwenye joto la kawaida kwa muda mrefu sana baada ya kusaga.

Pendekezo: Usagaji wa nitrojeni kioevu lazima uwe wa kutosha, na ukuta wa seli ya sampuli unapaswa kuvunjwa iwezekanavyo;mara baada ya kusaga, poda ya sampuli inapaswa kuhamishwa hadi 65℃imewasha joto Buffer PL1 kwa hatua inayofuata.

4. Kutotumia kit sahihi.

Pendekezo: Tumia Seti maalum ya Kutenga DNA ya Mimea ili kutoa na kusafisha DNA ya mmea.

5. Uhifadhi usiofaa wa Foregene Protease husababisha shughuli iliyopunguzwa au iliyozimwa.

Pendekezo: Thibitisha masharti ya uhifadhi wa Foregene Protease au ubadilishe na Foregene Protease mpya kwa hidrolisisi ya enzymatic.

6. Tatizo la Eluent

Pendekezo: Tafadhali tumia Buffer EB kwa elution;ikiwa unatumia ddH₂O au vielelezo vingine, hakikisha pH ya kielelezo ni kati ya 7.0-8.5.

7. Kielelezo hakijadondoshwa kwa usahihi

Pendekezo: Tafadhali ongeza tone la elution katikati ya membrane ya silika na uiache kwenye joto la kawaida kwa dakika 5 ili kuongeza ufanisi wa elution.

8. Kiasi cha ujazo ni kidogo sana

Pendekezo: Tafadhali tumia kielelezo cha ufafanuzi wa DNA ya genomic kulingana na maagizo, angalau si chini ya 100.μl.

DNA ya jeni iliyotolewa na usafi wa chini

Usafi mdogo wa DNA ya jeni itasababisha kushindwa au athari mbaya ya majaribio ya chini, kama vile: kimeng'enya hakiwezi kukatwa, na kipande cha jeni lengwa hakiwezi kupatikana kwa PCR.

1. Ukolezi wa protini mbalimbali, uchafuzi wa RNA.

Uchambuzi: Buffer PW haikutumika kuosha safu;Buffer PW haikutumika kuosha safu kwa kasi sahihi ya kupenyeza.

Pendekezo: jaribu kuhakikisha kuwa hakuna mvua katika nguvu ya juu wakati nguvu kuu inapitishwa kupitia safu;hakikisha kuosha safu ya utakaso na Buffer PW kulingana na maagizo, na hatua hii haiwezi kuachwa.

2. Uchafuzi wa ioni ya uchafu.

Uchambuzi: Safu wima ya kuosha ya Buffer WB iliachwa au ilioshwa mara moja tu, na kusababisha uchafuzi wa ioni uliobaki.

Pendekezo: Hakikisha kuosha mara mbili kwa Buffer WB kulingana na maagizo ili kuondoa ioni zilizobaki iwezekanavyo.

3. Ukolezi wa RNase.

Uchambuzi: RNase ya Kigeni imeongezwa kwenye Bufa;operesheni isiyo sahihi ya kuosha katika Buffer PW itasababisha mabaki ya RNase na kuathiri shughuli za majaribio ya RNA ya chini ya mkondo, kama vile unukuzi wa in vitro.

Pendekezo: Seti za uchimbaji wa asidi ya nuklei za mfululizo wa Foregene zinaweza kuondoa RNA bila RNase ya ziada, na vitendanishi vyote kwenye Kifurushi cha Kutenga cha DNA ya Mimea havihitaji RNase;hakikisha kuosha safu ya utakaso na Buffer PW kulingana na maagizo, na hatua hii haiwezi kuachwa.

4. Mabaki ya ethanoli.

Uchambuzi: Baada ya kuosha safu wima ya utakaso na Buffer WB, hakuna upenyezaji wa bomba tupu ulifanywa.

Pendekezo: Fuata maagizo ya upenyezaji sahihi wa bomba tupu.

Mwongozo wa maagizo:

Mwongozo wa Maagizo ya Vifaa vya Kutengwa kwa DNA ya mmea