Hivi majuzi, niligundua kitu cha kushangaza!Wataalamu wengi wa majaribio ya hali ya juu karibu naye hata hawajui vidokezo vya msingi vya maarifa ya majaribio.

Kwa mfano, je, unaweza kujibu maswali yafuatayo?

Kuna tofauti kati ya OD260 na A260?Kila moja ina maana gani?
OD ni ufupisho wa msongamano wa macho (wiani wa macho), A ni kifupi cha kunyonya (absorbance), dhana mbili ni sawa, "wiani wa macho" ni "absorbance", lakini "wiani wa macho" inalingana na viwango vingi vya kitaifa na sanifu zaidi.

Kwa kawaida tunapima thamani ya OD katika 260nm ili kukokotoa mkusanyiko wa asidi ya nukleiki, kwa hivyo 1OD inawakilisha nini?
Asidi ya nyuklia ina kilele cha juu cha kunyonya kwa urefu wa 260nm, ambayo ina DNA na RNA, pamoja na vipande vya asidi ya nucleic iliyogawanyika (hii ndiyo hatua muhimu).
Thamani ya OD iliyopimwa kwa urefu wa wimbi wa nm 260 ilirekodiwa kama OD260.Ikiwa sampuli ni safi, thamani ya OD260 inaweza kukokotoa mkusanyiko wa sampuli ya asidi nukleiki.
1 OD260=50 μg/ml dsDNA (DNA yenye nyuzi mbili)
=37 μg/ml ssDNA (DNA ya nyuzi moja)
=40 μg/ml RNA
=30 μg/ml dNTPs (oligonucleotidi)
Je, kuna uhusiano wowote na tofauti kati ya RT-PCR, Realtime-PCR na QPCR?
RT-PCR ni kifupi cha Reverse Transcription PCR
Wakati Halisi PCR=qPCR, kifupi cha Kimahesabu cha Muda Halisi PCR
Ingawa PCR ya Wakati Halisi (PCR ya wakati halisi wa fluorescent) na Reverse Transcription PCR (reverse transcription PCR) zote zinaonekana kufupishwa kama RT-PCR.Lakini mkataba wa kimataifa ni: RT-PCR hasa inarejelea unukuzi wa kinyume PCR.

Je, ni nt, bp, na kb gani zinazotumiwa sana kuelezea urefu wa DNA/RNA katika biolojia?
nt = nucleotidi
bp = jozi ya msingi jozi
kb = kilobase

Bila shaka, unaweza kusema kwamba watu wengi hawajali kuhusu maelezo haya madogo!Kila mtu anafanya hivi, na hakuna mtu atakuuliza ni nini.Unajua hii sio lazima, sivyo?

Hapana, Hapana, Hapana, ni muhimu sana kujua hili!kwa sababu ya lipi?
Kwa sababu unataka kuchapisha makala!Ndugu!Iwe unalenga kuhitimu au kufuata mafanikio ya utafiti wa kisayansi, lazima utegemee makala ili kuzungumza!

Uchimbaji wa asidi ya nyuklia unapaswa kuwa jaribio rahisi na la msingi zaidi.Ubora wa uchimbaji wa asidi ya nucleic huamua moja kwa moja matokeo ya majaribio yafuatayo.

Ingawa nimesema mara nyingi, bado kuna marafiki wengi ambao hawajali.Wakati huu niliamua kuondoka kwenye makala!

Taarifa ya Chini ya Uchapishaji wa Majaribio ya Muda Halisi ya PCR, yanayojulikana kama MIQE.Kupitia hali ya majaribio na mbinu za uchanganuzi zinazotolewa na mtafiti, wakaguzi wanaweza kutathmini vyema uhalali wa mpango wa majaribio wa mtafiti.

Inaweza kuonekana kuwa katika sehemu ya uchimbaji wa asidi ya nucleic, vitu vifuatavyo vya kugundua vimependekezwa:

"E" inaonyesha habari ambayo lazima itolewe na "D" inaonyesha habari ambayo inapaswa kutolewa ikiwa ni lazima.

Fomu hiyo ni ngumu sana, kwa kweli, nataka kusema kwamba kila mtu anahitaji kuanza kutoka

usafi (D), mavuno (D), uadilifu (E) na uthabiti (E) kutathmini asidi Nucleic katika vipengele hivi vinne.

Kwa mujibu wa tabia za majaribio, kwanza kuzungumza juu ya mbinu za tathmini ya usafi na mkusanyiko.

Kipimo cha OD ndiyo njia inayopendwa na rahisi zaidi ya utambuzi kwa wanaojaribu.Kuhusu kanuni, sitaingia kwa undani hapa.Maabara nyingi sasa zinatumia spectrophotometers za Ultra-micro ili kuchanganua moja kwa moja sampuli za asidi ya nukleiki.Huku ikionyesha thamani ya ufyonzaji, programu hutoa thamani ya mkusanyiko moja kwa moja (asidi ya nukleiki, protini na rangi ya fluorescent) na uwiano unaohusiana.Kuhusu uchanganuzi wa thamani ya OD, Hifadhi picha hii na utakuwa sawa.

Orodha ya suluhisho la thamani ya OD ya Universal

Walakini, kuna tahadhari chache ambazo zinahitaji kutolewa kando kwako.

(Baada ya yote, najua ninyi lazima mtakuwa mnaweka akiba na kusubiri hadi mtakapozihitaji!)

Kumbuka 1 Vifaa

Thamani ya OD itaathiriwa na vifaa tofauti.Alimradi OD260 iko ndani ya masafa fulani, thamani za OD230 na OD280 zina maana.Kwa mfano, safu ya kunyonya ya Eppendorf D30 ya kawaida katika 260nm ni 0~3A, na NanoDrop One ya Thermo iko katika 260nm.Kiwango cha kunyonya cha 0.5~62.5A.

Kumbuka 2Reagent ya dilution

Thamani ya OD inaweza kuathiriwa na dilution ya vitendanishi tofauti.Kwa mfano, usomaji wa OD260/280 wa RNA iliyosafishwa katika pH7.5 10mM Trisbafa iko kati ya 1.9-2.1, ikiwa ndanisuluhisho la maji ya neutraluwiano utakuwa chini, labda tu 1.8-2.0, lakini hii haina maana kwamba ubora wa RNA hubadilisha Tofauti.

Kumbuka 3Dutu zilizobaki

Kuwepo kwa vitu vya mabaki kutaathiri usahihi wa kipimo cha ukolezi wa asidi ya nucleic, kwa hiyo ni muhimu kuepuka protini, phenoli, polysaccharide na mabaki ya polyphenoli katika sampuli za asidi ya nucleic iwezekanavyo.

Hata hivyo, kwa kweli, uchimbaji na vitendanishi vya kikaboni ni njia ya zamani.Katika vifaa vya kibiashara, athari ya uchimbaji inaweza kupatikana kupitia safu wima ya utangazaji yenye msingi wa silika pamoja na uwekaji katikati, kuepuka vitendanishi vyenye sumu na hatari ambavyo ni vigumu kuviondoa, n.k. Tatizo, kama vileSeti ya uchimbaji wa asidi nucleiki ya Foregene, haitumii DNase/RNase na vitendanishi vya kikaboni vyenye sumu wakati wote wa operesheni, haraka na salama., naathari ninzuri(kwa bahati mbaya alisema kuwa ni bald, lakini najua unataka kujua).

Mfano 1: Mavuno ya uchimbaji wa DNA ya Genomic na usafi

Seti ya Kutenga ya DNA ya Udongo wa Foregene (DE-05511) hushughulikia sampuli za udongo kutoka vyanzo mbalimbali, na kiasi na usafi wa DNA ya jeni inayopatikana imeonyeshwa kwenye jedwali lifuatalo:
Mfano 2: Mavuno ya uchimbaji wa tishu RNA na usafi

Seti ya Kutenga ya RNA ya Wanyama (RE-03012) ilichakata sampuli mbalimbali za tishu, na kiasi na usafi wa RNA iliyopatikana imeonyeshwa kwenye jedwali hapa chini (kwa tishu za panya):
Walakini, usifikirie kuwa umekamilika na thamani ya OD.Je! una kitu cha kutunza pointi muhimu nilizokuchorea hapo mbele?

Taarifa

Molekuli za asidi ya nucleiki zilizogawanyika pia zitahesabiwa katika kunyonya.Ikizingatiwa kuwa una mabaki ya DNA ya jeni katika RNA, thamani yako ya OD itaonekana kuwa ya juu sana, lakini mkusanyiko halisi wa RNA hauwezi kubainishwa.Iwapo RNA yako ni Haijulikani wazi kama kuna uharibifu, kwa hivyo bado tunahitaji mbinu ya kina ya tathmini ili kutoa uamuzi sahihi zaidi, yaani, tathmini ya uadilifu ya asidi ya nuklei iliyotajwa katika MIQE.