• facebook
  • zilizounganishwa
  • youtube

Seti ya uchimbaji wa DNA ya kadi ya Buccal/FTA

Uchambuzi ufuatao wa shida zinazowezekana katikaBuccalswab/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

 

Safu ya utakaso imefungwa

 

 

Katika kit hiki, katika operesheni ya uchimbaji wa DNA ya genomic, safu ya utakaso inatangazwa moja kwa moja kwenye mchanganyiko wa sampuli ya enzymatic lysis bila hatua ya centrifugation, na safu ya utakaso inaweza kuzuiwa kutokana na enzymization isiyo kamili na mnato wa juu wa sampuli.

Sababu zifuatazo zinazowezekana ni kama ifuatavyo:

1. Usagaji wa enzymatic usio kamili wa sampuli za tishu.

Pendekezo: Sampuli ya muda wa usindikaji wa Foregene Protease unaweza kuongezwa ipasavyo au dawa ya juu inaweza kuchukuliwa baada ya kuingizwa kwa kasi ya 12,000 rpm (~13,400× g) kwa dakika 5.

2. Matumizi mengi ya sampuli za tishu au tishu kubwa.

Pendekezo: Ni bora kutozidi 1Buccal swab katika sampuli;ikiwa sampuli ni kubwa mno, ongeza kipimo cha Buffer ST1, Foregene Protease, buffer ST2 ipasavyo.

3. Sampuli ya mnato ni ya juu sana.

Pendekezo: Sampuli zinaweza kuyeyushwa ipasavyo na 10 mm ya Tris-HCl kabla ya uchimbaji wa DNA ya genomic.

4. Vipande vya kadi ya damu vimefyonzwa.

Pendekezo: Muda wa muda wa kupenyeza wa hatua ya 6 wa doa la damu (Kadi ya FTA) uchimbaji wa jeni unaweza kuongezwa ipasavyo.

 

Mavuno ya chini au hakuna DNA

 

Mara nyingi kuna sababu mbalimbali zinazoathiri uzalishaji wa DNA ya jeni, ikiwa ni pamoja na asili ya sampuli, hali ya uhifadhi wa sampuli, utayarishaji wa sampuli, upotoshaji, n.k.

DNA ya genomic haiwezi kupatikana wakati wa uchimbaji

Sababu zinazowezekana ni kama ifuatavyo:

1. Uhifadhi usiofaa wa sampuli au uhifadhi kwa muda mrefu husababisha uharibifu wa DNA ya genomic.

Pendekezo: Sufi za mdomo zinafaa kuwa sampuli mpya, na haifai kutumia usufi zilizohifadhiwa kwa shughuli za uchimbaji wa DNA ya jenasi;sampuli za damu zinapaswa kuhakikisha kuwa ubora umehitimu na muda wa kuhifadhi usiwe mrefu sana.

2. Utumizi mdogo sana wa tishu unaweza kusababisha kutotolewa kwa DNA ya jeni inayolingana.

Pendekezo: Fuatabuccal maelekezo ya sampuli za usufi kwenye mwongozo wa operesheni, na uifute mara nyingi iwezekanavyo ili seli za kutosha ziweze kuunganishwa kwenye usufi mdomo kwa ajili ya uchimbaji wa DNA ya genomic;kwa ajili ya uchimbaji wa sampuli ya doa la damu, eneo la kukata doa la damu linaweza kuongezeka ipasavyo.

3. Foregene Protease imehifadhiwa vibaya, na kusababisha kupungua kwa shughuli zake au kutofanya kazi.

Pendekezo: Thibitisha masharti ya uhifadhi waForegene Protease au uibadilishe na Foregene Protease mpya kwa mmenyuko wa enzymatic.

4. Uhifadhi usiofaa wa kit au muda wa kuhifadhi ni mrefu sana, na kusababisha kushindwa kwa baadhi ya vipengele kwenye kit.

Pendekezo: Nunua mpyaBuccal DNA ya swabkujitenga kit kwa taratibu zinazohusiana.

5. Buffer WB haiongezi ethanoli kabisa.

Pendekezo: Thibitisha kuwa bafa WB inaongeza kiwango sahihi cha ethanoli kabisa.

6. Kielelezo hakijaongezwa kwa usahihi kwenye filamu ya silicone.

Pendekezo: Ongeza 65°Ckabla ya kupashwa joto hushuka hadi katikati ya utando wa silikoni na kuondoka kwenye joto la kawaida kwa dakika 5 ili kuongeza ufanisi wa elution.

Low-ield genomic DNA kutengwa

Sababu zifuatazo zinazowezekana ni kama ifuatavyo:

1. Uhifadhi usiofaa wa sampuli au uhifadhi kwa muda mrefu husababisha uharibifu wa DNA ya genomic.

Pendekezo: Sufi za mdomo ni bora zaidi zichukuliwe sampuli mpya, na usufi zilizohifadhiwa hazipaswi kutumika kwa uchimbaji wa DNA ya jenomu.

2. Ikiwa kiasi cha sampuli ya tishu ni kidogo sana, maudhui ya DNA ya jeni yaliyotolewa yatakuwa kidogo.

Pendekezo: Fuata maagizo ya sampuli ya usufi wa mdomo kwenye mwongozo wa uendeshaji, ukifuta mara nyingi iwezekanavyo ili seli za kutosha ziweze kuunganishwa kwenye usufi mdomoni kwa ajili ya uchimbaji wa DNA ya jeni.

3. Foregene Protease imehifadhiwa vibaya, na kusababisha kupungua kwa shughuli zake au kutofanya kazi.

Pendekezo: Thibitisha masharti ya uhifadhi wathe Foregene Protease au uibadilishe na mpya Foregene Protease kwa mmenyuko wa enzymatic.

4. Matatizo ya ufaulu.

Pendekezo: Tumia Buffer EB kwa elution;ikiwa unatumia ddH2O au vidokezo vingine, thibitisha kuwa pH ya eluate ni kati ya 7.0-8.5.

5. Kielelezo hakijaongezwa kwa njia sahihi.

Pendekezo: Ongeza matone machache katikati ya utando wa silikoni na uache kwenye halijoto ya kawaida kwa dakika 5 ili kuongeza ufanisi wa kuyeyusha.

6. Kioevu cha elution hujilimbikiza kidogo sana.

Pendekezo: Tumia ufafanuzi kwa ufafanuzi wa DNA ya jeni kama inavyotakiwa katika maagizo, angalausi kidogo zaidi ya 15μl.

Lusafi oh of DNA ya genomickutengwa

Usafi wa chini wa DNA ya genomic unaweza kusababisha kushindwa au matokeo yasiyoridhisha ya majaribio ya chini, kama vile: vimeng'enya haviwezi kukatwa wazi, PCR haiwezi kupata kipande cha jeni cha riba, nk.

Sababu zinazowezekana ni kama ifuatavyo:

1. Uchafuzi wa heteroprotein, uchafuzi wa RNA.

Uchambuzi: Safu ya utakaso haikuoshwa kwa kutumia Buffer PW;safu ya utakaso ya Buffer PW haikuoshwa kwa kutumia kasi sahihi ya centrifugal.

Pendekezo: Hakikisha kuwa hakuna mvua katika nguvu ya juu kabla ya kuongeza ethanoli;hakikisha kuosha safu ya utakaso kulingana na maagizo, na hatua hii haiwezi kuachwa.

2. Uchafuzi wa ioni ya uchafu.

Uchambuzi: Safu wima ya utakaso wa Buffer WB iliachwa au kuoshwa mara moja tu, na kusababisha uchafuzi wa ioni uliobaki.

Pendekezo: Hakikisha umeosha Buffer WB mara 2 kama ilivyoelekezwa ili kuondoa ayoni zilizobaki iwezekanavyo.

3. Uchafuzi wa enzyme ya RNA.

Uchambuzi: RNasi za Kigeni ziliongezwa kwenye bafa;Operesheni ya safisha ya Buffer PW haikuwa sahihi, na kusababisha mabaki ya RNase, na kuathiri shughuli za majaribio ya RNA ya chini, kama vile unukuzi wa in vitro.

Pendekezo: Foregene series nucleic acidisolavifaa vya tion vinaweza kuondoa RNA bila nyongeza ya ziada ya RNase,hivyo buccal Swab/FTA Kadi ya Kutenga DNA Kithaja't ongeza RNase;hakikisha kuwa umefuata maagizo ya safu wima ya utakaso ya kuosha Buffer PW, na hatua hii haiwezi kuachwa.

4. Mabaki ya ethanoli.

Uchambuzi: Buffer WB haikufanya upenyezaji wa bomba tupu baada ya kuosha safu wima ya utakaso.

Pendekezo: Fanya operesheni sahihi ya upenyezaji wa bomba tupu kulingana na maagizo.

5. Uchafuzi mwingine wa uchafu.

Uchambuzi: Sampuli zilizohifadhiwa au sampuli maalum hazijatibiwa mapema.

Pendekezo: Suluhisha kikamilifu sampuli kama ulivyoelekezwa.

 


Muda wa posta: Mar-18-2022