Maswali Yanayoulizwa Mara kwa Mara kwaSeti ya Kutengwa kwa RNA ya Wanyama

Uchambuzi ufuatao wa shida unazoweza kukutana nazouchimbaji wa tishu za wanyama/seli RNA will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

RNA haijatolewa au mavuno ya RNA ni ya chini

Mara nyingi kuna mambo mbalimbali yanayoathiri ufanisi wa uokoaji, kama vile: maudhui ya sampuli ya tishu ya RNA, njia ya uendeshaji, kiasi cha elution, nk.

1. Umwagaji wa barafu au cryogenic (4 °C) centrifugation ulifanyika wakati wa operesheni.

Pendekezo: Fanya kazi kwenye joto la kawaida (15-25 ° C) katika mchakato mzima, usiweke umwagaji wa barafu na centrifuge kwenye joto la chini.

2. Uhifadhi usiofaa wa sampuli au muda mwingi wa kuhifadhi sampuli.

Pendekezo: Hifadhi sampuli kwa -80 °C au zigandishe katika nitrojeni kioevu na uepuke matumizi ya mara kwa mara ya kufungia-yeyusha;jaribu kutumia tishu mpya au seli zilizokuzwa kwa uchimbaji wa RNA.

3. Uchambuzi wa sampuli haitoshi.

Pendekezo: Wakati wa kutengeneza homojeni ya tishu, hakikisha kwamba tishu zimeunganishwa vya kutosha na kwamba seli za tishu zimegawanyika vya kutosha kueleza kutolewa kwa RNA.

4. Kielelezo hakijaongezwa ipasavyo.

Pendekezo: Thibitisha kuwa RNase-Free ddH₂O huongezwa kwa njia ya kushuka katikati ya utando wa safu ya utakaso.

5. Kiasi sahihi cha ethanoli kabisa hakikuongezwa kwa Buffer RL2 au Buffer RW2.

Pendekezo: Fuata maagizo, ongeza kiasi sahihi cha ethanoli kabisa kwenye Buffer RL2 na Buffer RW2 na uchanganye vizuri kabla ya kutumia kit.

6. Kipimo cha sampuli ya tishu haifai.

Pendekezo: Tumia 10-20 mg ya tishu au (1-5) × 10⁶seli kwa kila 500 μl bafa RL1, kwani matumizi ya tishu kupita kiasi yanaweza kusababisha utoboaji wa RNA uliopunguzwa.

7. Kiasi kisichofaa cha elution au upotoshaji usio kamili.

Pendekezo: Kiasi cha elution ya safu ya utakaso ni 50-200 μl;ikiwa athari ya kufichua si ya kuridhisha, inashauriwa kuongeza muda wa kuweka halijoto ya chumba baada ya kuongeza ddH isiyo na joto ya RNase-Free.₂O, kwa mfano kwa dakika 5-10.

8.Safu ya utakaso ina mabaki ya ethanoli baada ya kuosha kwa Buffer RW2.

Pendekezo: Iwapo kuna mabaki ya ethanoli baada ya kuoshwa kwa Buffer RW2, upenyezaji wa bomba tupu kwa dakika 1, muda wa operesheni ya upenyezaji wa mirija tupu unaweza kuongezwa hadi dakika 2, au safu ya utakaso inaweza kuwekwa kwenye joto la kawaida kwa dakika 5 ili kuondoa ethanoli iliyobaki vya kutosha.

RNA iliyosafishwa imeharibika

Ubora wa RNA iliyosafishwa inahusiana na mambo kama vile uhifadhi wa sampuli, uchafuzi wa RNase, na upotoshaji, n.k.

1. Sampuli za tishu hazitunzwa kwa wakati.

Pendekezo: Ikiwa sampuli za tishu au seli hazitumiki kwa wakati ufaao baada ya kukusanywa, hifadhi mara moja kwenye -80 °C au nitrojeni kioevu.Ili kutoa RNA, tumia tishu mpya au sampuli ya seli inapowezekana.

2. Kufungia mara kwa mara kwa sampuli za tishu.

Pendekezo: Wakati wa kuhifadhi sampuli za tishu, ni bora kuzikatwa vipande vidogo kwa ajili ya kuhifadhi, na kuondoa moja ya vipande wakati wa kutumia ili kuepuka kufungia mara kwa mara kwa sampuli na uharibifu wa RNA.

3. RNase imetambulishwa au haijavaa glavu, masks, nk wakati wa operesheni.

Pendekezo: Majaribio ya uchimbaji wa RNA hufanywa vyema zaidi katika vyumba tofauti vya upotoshaji vya RNA na jedwali huondolewa kabla ya jaribio.

Vaa glavu na vinyago vinavyoweza kutupwa wakati wa jaribio ili kupunguza uharibifu wa RNA unaosababishwa na kuanzishwa kwa RNase.

4. Vitendanishi huchafuliwa na RNase wakati wa matumizi.

Pendekezo: Badilisha na Seti mpya ya Kutenga ya RNA ya Wanyama kwa majaribio yanayohusiana.

5. Mirija ya katikati, vidokezo, n.k. inayotumika katika upotoshaji wa RNA imechafuliwa na RNase.

Pendekezo: Thibitisha kuwa mirija ya katikati, vidokezo, bomba, n.k. zinazotumika katika uchimbaji wa RNA zote hazina RNase.

RNA iliyopatikana iliyosafishwa huathiri majaribio ya chini ya mkondo

RNA iliyosafishwa kwa safu wima ya utakaso, ikiwa ioni za chumvi, maudhui ya protini ni makubwa sana yataathiri jaribio la mto, kama vile: unukuzi wa kinyume,Northern Blot et al.

1. RNA iliyoondolewa ina mabaki ya ioni ya chumvi.

Pendekezo: Thibitisha kuwa kiasi sahihi cha ethanoli kimeongezwa kwenye Buffer RW2 na ufanye safu 2 za utakaso kwa kasi ya katikati iliyoonyeshwa kwa operesheni;ikiwa kuna mabaki yoyote ya ioni ya chumvi, acha safu wima ya utakaso hadi kwenye Bufa RW2 kwa dakika 5 kwa joto la kawaida na uimarishe katikati ili kuongeza uondoaji wa uchafuzi wa chumvi.

2. Mabaki ya ethanoli katika RNA iliyopunguzwa.

Pendekezo: Thibitisha kuwa baada ya kuosha bafa ya RW2, fanya operesheni tupu ya kupenyeza mirija kwa kasi ya centrifugation iliyoonyeshwa kwa ajili ya uendeshaji, ongeza muda wa operesheni ya upenyezaji wa mirija tupu hadi dakika 2 ikiwa bado kuna mabaki ya ethanoli, au uiache kwenye joto la kawaida kwa dakika 5 baada ya bomba tupu la centrifugation ili kuongeza uondoaji wa ethanol.

Kutengwa kwa aina za sampuli za asidi ya nulceic

Seti za Kutenga za RNA za Foregene zinaweza kupata kutengwa/kutolewa kwa RNA kwa jumla kutoka kwa sampuli za sampuli zifuatazo: Tishu za wanyama, mmea, seli, virusi, damu, n.k.

Ninawezaje kuhifadhi kit

Uhifadhi wa joto la chumba kwa miezi 24.