Seti ya Kutenga ya DNA ya Buccal/FTA Kadi ya Kutenga DNA ya Genomic au Seti ya Utakaso kutoka kwa Swabs za Buccal
Maelezo ya Kiti:
Safisha kwa haraka DNA ya jeni ya ubora wa juu kutoka kwa sampuli za Kadi ya FTA.
◮Hakuna uchafuzi wa RNase:Safu ya DNA-Pekee iliyotolewa na kit huwezesha kuondoa RNA kutoka kwa DNA ya jeni bila kuongeza RNase wakati wa jaribio, kuzuia maabara kuchafuliwa na RNase ya kigeni.
◮Kasi ya haraka:Foregene Protease ina shughuli ya juu zaidi kuliko protease zinazofanana, na huyeyusha sampuli za tishu haraka;operesheni ni rahisi, na operesheni ya uchimbaji wa DNA ya genomic inaweza kukamilika ndani ya dakika 20-80.
◮Rahisi:Uingizaji hewa unafanywa kwa joto la kawaida, na hakuna haja ya 4 ° C ya joto la chini centrifugation au mvua ya ethanol ya DNA.
◮Usalama:Hakuna uchimbaji wa reagent ya kikaboni inahitajika.
◮Ubora wa juu:DNA ya jeni iliyotolewa ina vipande vikubwa, hakuna RNA, hakuna RNase, na maudhui ya ioni ya chini sana, ambayo yanaweza kukidhi mahitaji ya majaribio mbalimbali.
◮Mfumo wa Uchambuzi wa Micro-elution:Inaweza kuongeza mkusanyiko wa DNA ya jeni, ambayo ni rahisi kwa ugunduzi au majaribio ya chini ya mkondo.
Maelezo
Seti hii hutoa njia bora na ya haraka ya kupata DNA ya jeni ya ukolezi wa juu kutoka kwa swabs za buccal na Kadi ya FTA (madoa ya damu).Kwa kutumia kampuni yetu'Safu na fomula ya kipekee ya silika ya silika ya DNA, ikichanganywa na Foregene Protease, DNA ya jeni ya ukolezi wa juu na ya ubora wa juu inaweza kutolewa baada ya dakika 80.Safu ndogo iliyoundwa maalum ya utakaso hufunga DNA ya jeni, na DNA inaweza kutolewa kwa kiasi kidogo (15μl) mfumo wa elution ili kuongeza mkusanyiko wa DNA ya jeni iliyopatikana, ambayo ni rahisi kwa ugunduzi au majaribio ya chini ya mkondo.Seti inaweza kuchakata sampuli moja au zaidi kwa wakati mmoja, na mchakato wa utakaso hauhitaji uchimbaji wa vitu vya kikaboni kama vile fenoli, klorofomu, na unyevu wa isopropanoli au ethanol inayochukua muda mrefu, na operesheni ni rahisi na inaokoa muda.
Vipimo
50 Maandalizi
Vipengele vya kit
| Bafa ST1 |
| Bafa ST2 |
| Linear Acrylamide |
| Bafa PW |
| Bafa WB |
| Bafa EB |
| Foregene Protease |
| Safu wima ya DNA Pekee |
| Maagizo |
Vipengele&faida
-Hakuna uchafuzi wa RNase: Safu ya Safu ya DNA Pekee iliyotolewa na kit huwezesha kuondoa RNA kutoka kwa DNA ya jeni bila kuongeza RNase wakati wa jaribio, ili kuzuia maabara kuchafuliwa na RNase ya kigeni.
-Kasi ya haraka: Foregene Protease ina shughuli nyingi kuliko protease zinazofanana, humeng'enya sampuli haraka;operesheni rahisi.
-Urahisi: Uwekaji katikati unafanywa kwa joto la kawaida, na hakuna haja ya 4°C ya kiwango cha chini cha centrifugation au mvua ya ethanoli ya DNA.
-Usalama: Hakuna uchimbaji wa vitendanishi vya kikaboni unahitajika.
-Ubora wa juu: DNA ya jeni iliyotolewa ina vipande vikubwa, hakuna RNA, hakuna RNase, na maudhui ya ioni ya chini sana, ambayo yanaweza kukidhi mahitaji ya majaribio mbalimbali.
-Mfumo wa uchanganuzi mdogo: Inaweza kuongeza mkusanyiko wa DNA ya jeni, ambayo ni rahisi kugundua au majaribio ya chini ya mkondo.
Programu ya kit
Inafaa kwa ajili ya utakaso wa DNA ya genomic kutoka kwa sampuli zifuatazo: swabs za buccal, Kadi ya FTA (madoa ya damu).
Uhifadhi na maisha ya rafu
-Kit hiki kinaweza kuhifadhiwa kwa muda wa miezi 12 chini ya hali kavu kwenye joto la kawaida (15-25 ° C);ikiwa inahitaji kuhifadhiwa kwa muda mrefu, inaweza kuhifadhiwa kwa 2-8 ° C.
Kumbuka: Ikiwa imehifadhiwa kwa joto la chini, suluhisho linaweza kukabiliwa na mvua.Kabla ya matumizi, hakikisha kuweka suluhisho kwenye kit kwenye joto la kawaida kwa muda.Ikiwa ni lazima, joto katika umwagaji wa maji 37 ° C kwa dakika 10 ili kufuta mvua, na kuchanganya kabla ya matumizi.
Suluhisho la Forgene Protease lina fomula ya kipekee, ambayo inafanya kazi wakati imehifadhiwa kwa joto la kawaida kwa muda mrefu (miezi 3);shughuli zake na utulivu zitakuwa bora wakati zimehifadhiwa kwa 4 ° C, kwa hiyo inashauriwa kuihifadhi kwa 4 ° C, kumbuka usiiweke -20 ° C.
Safu ya utakaso imefungwa
Katika kit hiki, katika operesheni ya uchimbaji wa DNA ya genomic, safu ya utakaso inatangazwa moja kwa moja kwenye mchanganyiko wa sampuli ya enzymatic lysis bila hatua ya centrifugation, na safu ya utakaso inaweza kuzuiwa kutokana na enzymization isiyo kamili na mnato wa juu wa sampuli.
Sababu zifuatazo zinazowezekana ni kama ifuatavyo:
1. Usagaji wa enzymatic usio kamili wa sampuli za tishu.
Pendekezo: Sampuli ya muda wa kuchakata Foregene Protease inaweza kuongezwa ipasavyo au dawa ya juu inaweza kuchukuliwa baada ya kupenyeza kwa kasi ya 12,000 rpm (~13,400 × g) kwa dakika 5.
2. Matumizi mengi ya sampuli za tishu au tishu kubwa.
Pendekezo: Ni bora usizidi swab 1 ya Buccal kwenye sampuli;ikiwa sampuli ni kubwa mno, ongeza kipimo cha Buffer ST1, Foregene Protease, buffer ST2 ipasavyo.
3. Sampuli ya mnato ni ya juu sana.
Pendekezo: Sampuli zinaweza kuyeyushwa ipasavyo na 10 mm ya Tris-HCl kabla ya uchimbaji wa DNA ya genomic.
4. Vipande vya kadi ya damu vimefyonzwa.
Pendekezo: Muda wa muda wa kupenyeza wa hatua ya 6 wa doa la damu (Kadi ya FTA) uchimbaji wa jeni unaweza kuongezwa ipasavyo.
Mavuno ya chini au hakuna DNA
Mara nyingi kuna sababu mbalimbali zinazoathiri uzalishaji wa DNA ya jeni, ikiwa ni pamoja na asili ya sampuli, hali ya uhifadhi wa sampuli, utayarishaji wa sampuli, upotoshaji, n.k.
DNA ya genomic haiwezi kupatikana wakati wa uchimbaji
Sababu zinazowezekana ni kama ifuatavyo:
1. Uhifadhi usiofaa wa sampuli au uhifadhi kwa muda mrefu husababisha uharibifu wa DNA ya genomic.
Pendekezo: Sufi za mdomo zinafaa kuwa sampuli mpya, na haifai kutumia usufi zilizohifadhiwa kwa shughuli za uchimbaji wa DNA ya jenasi;sampuli za damu zinapaswa kuhakikisha kuwa ubora umehitimu na muda wa kuhifadhi usiwe mrefu sana.
2. Utumizi mdogo sana wa tishu unaweza kusababisha kutotolewa kwa DNA ya jeni inayolingana.
Pendekezo: Fuata maagizo ya sampuli ya usufi kwenye mwongozo wa operesheni, na ufute mara nyingi iwezekanavyo ili seli za kutosha ziweze kuunganishwa kwenye usufi mdomoni kwa ajili ya uchimbaji wa DNA ya jeni;kwa ajili ya uchimbaji wa sampuli ya doa la damu, eneo la kukata doa la damu linaweza kuongezeka ipasavyo.
3. Foregene Protease imehifadhiwa vibaya, na kusababisha kupungua kwa shughuli zake au kutofanya kazi.
Pendekezo: Thibitisha masharti ya uhifadhi wa Foregene Protease au ubadilishe na Foregene Protease mpya kwa athari ya enzymatic.
4. Uhifadhi usiofaa wa kit au muda wa kuhifadhi ni mrefu sana, na kusababisha kushindwa kwa baadhi ya vipengele kwenye kit.
Pendekezo: Nunua seti mpya ya kutenganisha DNA ya usufi ya Buccal kwa taratibu zinazohusiana.
5. Buffer WB haiongezi ethanoli kabisa.
Pendekezo: Thibitisha kuwa bafa WB inaongeza kiwango sahihi cha ethanoli kabisa.
6. Kielelezo hakijaongezwa kwa usahihi kwenye filamu ya silicone.
Pendekezo: Ongeza matone 65 °C yaliyopashwa kabla ya joto hadi katikati ya utando wa silikoni na uondoke kwenye halijoto ya kawaida kwa dakika 5 ili kuongeza ufanisi wa kuyeyusha.
DNA ya chini ya mavuno ya genomic imetengwa
Sababu zifuatazo zinazowezekana ni kama ifuatavyo:
1. Uhifadhi usiofaa wa sampuli au uhifadhi kwa muda mrefu husababisha uharibifu wa DNA ya genomic.
Pendekezo: Sufi za mdomo ni bora zaidi zichukuliwe sampuli mpya, na usufi zilizohifadhiwa hazipaswi kutumika kwa uchimbaji wa DNA ya jenomu.
2. Ikiwa kiasi cha sampuli ya tishu ni kidogo sana, maudhui ya DNA ya jeni yaliyotolewa yatakuwa kidogo.
Pendekezo: Fuata maagizo ya sampuli ya usufi wa mdomo kwenye mwongozo wa uendeshaji, ukifuta mara nyingi iwezekanavyo ili seli za kutosha ziweze kuunganishwa kwenye usufi mdomoni kwa ajili ya uchimbaji wa DNA ya jeni.
3. Foregene Protease imehifadhiwa vibaya, na kusababisha kupungua kwa shughuli zake au kutofanya kazi.
Pendekezo: Thibitisha masharti ya uhifadhi wa Foregene Protease au ubadilishe na Foregene Protease mpya kwa athari ya enzymatic.
4. Matatizo ya ufaulu.
Pendekezo: Tumia Buffer EB kwa elution;ikiwa unatumia ddH2O au vidokezo vingine, thibitisha kuwa pH ya eluate ni kati ya 7.0-8.5.
5. Kielelezo hakijaongezwa kwa njia sahihi.
Pendekezo: Ongeza matone machache katikati ya utando wa silikoni na uache kwenye halijoto ya kawaida kwa dakika 5 ili kuongeza ufanisi wa kuyeyusha.
6. Kioevu cha elution hujilimbikiza kidogo sana.
Pendekezo: Tumia maelezo mafupi kwa ufafanuzi wa DNA ya jeni kama inavyotakiwa katika maagizo, angalau si chini ya 15 μl.
Usafi mdogo wa DNA ya genomic iliyotengwa
Usafi wa chini wa DNA ya genomic unaweza kusababisha kushindwa au matokeo yasiyoridhisha ya majaribio ya chini, kama vile: vimeng'enya haviwezi kukatwa wazi, PCR haiwezi kupata kipande cha jeni cha riba, nk.
Sababu zinazowezekana ni kama ifuatavyo:
1. Uchafuzi wa heteroprotein, uchafuzi wa RNA.
Uchambuzi: Safu ya utakaso haikuoshwa kwa kutumia Buffer PW;safu ya utakaso ya Buffer PW haikuoshwa kwa kutumia kasi sahihi ya centrifugal.
Pendekezo: Hakikisha kuwa hakuna mvua katika nguvu ya juu kabla ya kuongeza ethanoli;hakikisha kuosha safu ya utakaso kulingana na maagizo, na hatua hii haiwezi kuachwa.
2. Uchafuzi wa ioni ya uchafu.
Uchambuzi: Safu wima ya utakaso wa Buffer WB iliachwa au kuoshwa mara moja tu, na kusababisha uchafuzi wa ioni uliobaki.
Pendekezo: Hakikisha umeosha Buffer WB mara 2 kama ilivyoelekezwa ili kuondoa ayoni zilizobaki iwezekanavyo.
3. Uchafuzi wa enzyme ya RNA.
Uchambuzi: RNasi za Kigeni ziliongezwa kwenye bafa;Operesheni ya safisha ya Buffer PW haikuwa sahihi, na kusababisha mabaki ya RNase, na kuathiri shughuli za majaribio ya RNA ya chini, kama vile unukuzi wa in vitro.
Pendekezo: Seti za kutenganisha za asidi ya nuklei za mfululizo wa Foregene zinaweza kuondoa RNA bila nyongeza ya ziada ya RNase, kwa hivyo Seti ya Kutenga ya DNA ya Kadi ya Swab/FTA haihitaji kuongeza RNase;hakikisha kuwa umefuata maagizo ya safu wima ya utakaso ya kuosha Buffer PW, na hatua hii haiwezi kuachwa.
4. Mabaki ya ethanoli.
Uchambuzi: Buffer WB haikufanya upenyezaji wa bomba tupu baada ya kuosha safu wima ya utakaso.
Pendekezo: Fanya operesheni sahihi ya upenyezaji wa bomba tupu kulingana na maagizo.
5. Uchafuzi mwingine wa uchafu.
Uchambuzi: Sampuli zilizohifadhiwa au sampuli maalum hazijatibiwa mapema.
Pendekezo: Suluhisha kikamilifu sampuli kama ulivyoelekezwa.
